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公开(公告)号：CN103805711B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种提取DNA；C、Southern Blot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-time PCR检测,线性关系良好。
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公开(公告)号：CN103421743B
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201310214201.7
申请日：2013-05-31
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于植物免疫检测技术领域。具体涉及一种分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单克隆重组抗体的制备与应用。将伏马菌素B1分别与载体蛋白KLH和BSA偶联得到抗原，用所得FB1-KLH抗原免疫小鼠，细胞融合后进行选择性培养，利用FB1-BSA偶联物对杂交瘤细胞进行筛选，经亚克隆获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5。通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术筛选杂交瘤细胞株2C5的单克隆重组抗体H7。本发明对单克隆抗体和重组抗体进行了大量生产和纯化，所得的2C5单克隆抗体和H7重组抗体可用于伏马菌素的免疫检测。
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公开(公告)号：CN103014012B
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201210574749.8
申请日：2012-12-26
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/13 , C07K16/14 , C07K19/00 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了镰刀菌特异单链抗体及制备方法和应用，从串珠镰刀菌菌丝中抽提细胞壁蛋白，免疫来亨母鸡后提取脾脏细胞，利用分子克隆方法和技术构建单链抗体基因文库，通过噬菌体展示技术筛选、PhageELISA、表达ELISA和序列测定，获得了一个高亲和力的镰刀菌特异单链抗体及其编码基因，申请人将其命名为FvSG7，并与碱性磷酸酶基因构建融合蛋白表达载体，在大肠杆菌中进行可溶性表达，得到镰刀菌特异单链抗体FvSG7和FvSG7-AP融合蛋白，该抗体和融合蛋白可用于在植物或植物来源产品中镰刀菌污染情况的免疫学检测，为镰刀菌病情调查及出入境粮食和饲料中镰刀菌污染情况的检验检疫提供可靠有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN102453721B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201010511771.9
申请日：2010-10-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体涉及一种镰刀菌毒素ZEN的分子检测方法及应用。其特征是，针对玉米赤霉烯酮毒素(ZEN)，通过PKS4和PKS13基因序列信息设计了两对PCR引物PKS4-P1和PKS4-P2以及PKS13-P1和PKS13-P12，分别从产ZEN毒素的禾谷镰刀菌基因组中分离得到271bp、302bp的特异片段，采用PCR反应，利用琼脂糖凝胶电泳检测产物，直接根据产物片段的有无及大小，即可检测出禾谷镰刀菌产毒素ZEN的情况。本发明可用于谷物、饲料和食品安全中ZEN毒素的检测分析。
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公开(公告)号：CN103421743A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310214201.7
申请日：2013-05-31
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于植物免疫检测技术领域。具体涉及一种分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单克隆重组抗体的制备与应用。将伏马菌素B1分别与载体蛋白KLH和BSA偶联得到抗原，用所得FB1-KLH抗原免疫小鼠，细胞融合后进行选择性培养，利用FB1-BSA偶联物对杂交瘤细胞进行筛选，经亚克隆获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5。通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术筛选杂交瘤细胞株2C5的单克隆重组抗体H7。本发明对单克隆抗体和重组抗体进行了大量生产和纯化，所得的2C5单克隆抗体和H7重组抗体可用于伏马菌素的免疫检测。
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公开(公告)号：CN103374614A
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：名称 Accession 结合位点 序列5’-3’ Size Ta℃；RPL21-7 HM138481.1 928-955 For:CCTAGCCCGTTTCATCTAATGTGTCCTA 161 60；RPL21-8 1088-1062 Rev:TACTACCAACGAGAACCATTAGAGAGC。通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN102453093B
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201010527116.2
申请日：2010-10-28
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种抗伏马菌素单链抗体的筛选及其在伏马菌素免疫学检测方面的应用。直接从偶联的抗原FB1-KLH免疫的小鼠脾脏细胞出发，利用分子克隆方法和技术构建单链抗体基因文库，再通过噬菌体展示技术筛选、表达ELISA鉴定及序列测定，最后获得一个高亲和力的抗伏马菌素单链抗体及其编码基因，命名为FB-Mu 1H3。该单链抗体在大肠杆菌中进行大量表达纯化后可直接应用于伏马菌素的检测，包括在检测田间作物、饲料、粮食或食品伏马菌素污染中的应用。
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公开(公告)号：CN115005234A
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202210729877.9
申请日：2022-06-24
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于生物农药技术领域，公开了贝莱斯芽孢杆菌Bv‑6在防治水稻褐飞虱中的应用，所述的贝莱斯芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC No：M20191106。本发明首次发现贝莱斯芽孢杆菌Bv‑6可湿性粉剂对褐飞虱的防治效果达89%，为褐飞虱的防治提供了新的微生物制剂。
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公开(公告)号：CN107916266A
公开(公告)日：2018-04-17
申请号：CN201711272601.8
申请日：2017-12-05
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了镰刀菌毒素脱毒路径的相关基因ADH、AKR6D1、AKR13B2及其应用，通过原核表达基因ADH、AKR6D1、AKR13B2获得纯化的蛋白，体外实验证实纯化的三个蛋白一起可以催化脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），形成3-异构体-脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-eip-DON），其中ADH蛋白可氧化DON，形成3-酮基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-oxo-DON）；而AKR6D1、AKR13B2蛋白可进一步还原3-oxo-DON，形成目前已知毒性最低的物质3-epi-DON。
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公开(公告)号：CN104673705B
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201410778424.0
申请日：2014-12-15
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于植物病害防治技术领域，涉及一株防治小麦赤霉病的解淀粉芽孢杆菌菌株的及其应用。本发明分离的解淀粉芽孢杆菌S76‑3，保藏号为CCTCC NO：M2014315；其16S rDNA的核苷酸如SEQ ID NO：1所示。公开了该菌株的分离、鉴定、广谱抑菌作用、芽孢产量发酵优化以及在防治小麦赤霉病的田间应用。本发明的解淀粉芽孢杆菌发酵稀释液的液体菌剂可以有效的抑制田间小麦赤霉病的发生和危害，减少了麦穗中毒素的产生。该菌株的抗逆性强，菌剂对环境危害少，可作高效生防菌剂，本发明的解淀粉芽孢杆菌抑菌谱广，可抑制包括禾谷镰刀菌在内的10种植物病原真菌的生长，具有良好的开发和应用前景。
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