公开(公告)号：CN102980878A

公开(公告)日：2013-03-20

申请号：CN201210541443.2

申请日：2012-12-13

Applicant: 中国计量科学研究院

Inventor： 董莲华 ,  孟盈 ,  王晶 ,  傅博强 ,  高运华 ,  张玲

IPC: G01N21/64

Abstract: 本发明首次提供了一种质粒DNA定量检测试剂盒，具有采用高准确度的超声波-同位素稀释质谱法准确定量的质粒DNA标准品，弥补了现有试剂盒不能对质粒DNA进行定量的缺点。本发明还提供了一种质粒DNA定量检测方法，分别测定不同浓度的质粒DNA标准品的荧光信号强度，绘制浓度—荧光信号强度标准曲线；然后测定待测质粒DNA样品荧光信号强度，根据所绘制标准曲线可准确计算出待测样品的DNA浓度。本方法和试剂盒首次采用标准质粒作为荧光染料法中的DNA标准进行定量，灵敏度高，可检测低至1pg的DNA；线性范围广，可检测0.25ng/mL~1000ng/mL的质粒DNA；对标准质粒采用超声波-同位素稀释质谱方法定量，得到的量值不确定度低，准确度高。

公开(公告)号：CN103063783B

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201210541174.X

申请日：2012-12-13

Applicant: 中国计量科学研究院

Inventor： 董莲华 ,  孟盈 ,  王晶 ,  傅博强 ,  高运华 ,  张玲

IPC: G01N30/06 ,  G01N30/02

Abstract: 本发明首次建立了一种质粒DNA定量检测用标准品的制备方法，将质粒DNA经超声波处理成为长度为200bp以下的片段后，进行酶解，然后以核苷酸标准品和同位素标记的核苷酸作为内标，用高效液相色谱-质谱分离单核苷酸并准确定量。本发明提供了超声波处理质粒DNA的优选条件和高效液相色谱法分离四种核苷酸的条件。本方法精密度好，准确度高：采用核苷酸标准品，不依赖于DNA标准品，因此测量结果可溯源至核苷酸有证标准物质，从而保证测量结果的可靠和可溯源。由于用本方法可对质粒DNA进行绝对定量，可用于质粒DNA定量检测用标准品的制备。

公开(公告)号：CN103063783A

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201210541174.X

申请日：2012-12-13

Applicant: 中国计量科学研究院

Inventor： 董莲华 ,  孟盈 ,  王晶 ,  傅博强 ,  高运华 ,  张玲

IPC: G01N30/06 ,  G01N30/02

Abstract: 本发明首次建立了一种质粒DNA定量检测用标准品的制备方法，将质粒DNA经超声波处理成为长度为200bp以下的片段后，进行酶解，然后以核苷酸标准品和同位素标记的核苷酸作为内标，用高效液相色谱-质谱分离单核苷酸并准确定量。本发明提供了超声波处理质粒DNA的优选条件和高效液相色谱法分离四种核苷酸的条件。本方法精密度好，准确度高：采用核苷酸标准品，不依赖于DNA标准品，因此测量结果可溯源至核苷酸有证标准物质，从而保证测量结果的可靠和可溯源。由于用本方法可对质粒DNA进行绝对定量，可用于质粒DNA定量检测用标准品的制备。