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公开(公告)号：CN1272446C
公开(公告)日：2006-08-30
申请号：CN200310106548.6
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的活性检测方法，特征是：将DNA光修复酶与含胸腺嘧啶二聚体的DNA底物经近紫外照射不同时间的相应产物经分子-排阻高效液相色谱分析，在线检测底物单峰的260nm紫外吸收，根据底物所出的峰，计算峰面积及其变化值，即胸腺嘧啶二聚体的解聚程度，根据胸腺嘧啶二聚体解聚程度和时间比确定DNA光修复酶的活性；该方法操作简单，可方便地利用操作和分析软件对变化前后的DNA底物进行定量，结果可信度高，克服了现有技术对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷，适合于DNA光修复酶的实验室纯化和其产业化制备过程中的活性检测。
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公开(公告)号：CN1088108C
公开(公告)日：2002-07-24
申请号：CN97119714.8
申请日：1997-09-30
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明提供一种蛋白质工程的定点突变方案及其SM33 GI的突变体酶和双突变体酶，其特征在于将SM33 GI的247位或在同源性比较相当于247位的Gly替换为Asp，获得的突变体酶SM33 GI G247D，其酶活较野生型粗酶GI有明显的提高；再将带有Asp247的SM33 GI基因片段替代SM33 GI G138P基因的相应片段，可获得双突变体酶SM33 GI(G138P，G247D)，其酶活和热稳定性同时获得提高。
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公开(公告)号：CN1945332A
公开(公告)日：2007-04-11
申请号：CN200610096266.6
申请日：2006-10-01
Applicant: 中国科学技术大学
IPC: G01N33/543 , G01N21/55 , C12Q1/68
Abstract: 本发明测定DNA链上嘧啶二聚体含量的方法，特征是将末端经生物素修饰的带有一个嘧啶二聚体的探针DNA固定到芯片表面；制备嘧啶二聚体标准品；将0～80nM嘧啶二聚体标准品与0.2～5μg/ml嘧啶二聚体抗体混合，将表面等离子共振传感器检测混合液流过芯片表面的响应值对嘧啶二聚体浓度作图得标准曲线；将待测样品与建立标准曲线相同浓度的抗体混合，检测混合液流过芯片表面的响应值，即可据标准曲线得出样品中嘧啶二聚体的浓度。本发明检测快速，定量准确，重现性好；芯片可以重复使用，检测成本低；可检测的样品范围广；可用于光修复酶活性的检测、研究紫外线对DNA的损伤、DNA损伤修复，及评价臭氧层破坏对人体健康的影响。
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公开(公告)号：CN1624151A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200310106548.6
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的活性检测方法，特征是：将DNA光修复酶与含胸腺嘧啶二聚体的DNA底物经近紫外照射不同时间的相应产物经分子－排阻高效液相色谱分析，在线检测底物单峰的260nm紫外吸收，根据底物所出的峰，计算峰面积及其变化值，即胸腺嘧啶二聚体的解聚程度，根据胸腺嘧啶二聚体解聚程度和时间比确定DNA光修复酶的活性；该方法操作简单，可方便地利用操作和分析软件对变化前后的DNA底物进行定量，结果可信度高，克服了现有技术对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷，适合于DNA光修复酶的实验室纯化和其产业化制备过程中的活性检测。
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公开(公告)号：CN1055727C
公开(公告)日：2000-08-23
申请号：CN95112782.9
申请日：1995-11-27
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明利用蛋白质工程的定点突变方法改良葡萄糖异构酶，提供了一种获得热稳定性提高的GI有意义突变体的突变方案，其特征在于将GI的138位Gly或某些GI中在同源性比较上相当SM33 GI Gly138的Gly替换成Pro，采用本方法获得的SM33 GI的突变体酶GIG138P，其热失活半衰期比野生型GI提高了0.9-1.1倍，最适反应温度提高了10-12℃，比活与野生型酶相当，它是热稳定性和最适反应温度同时获得改善的有意义突变体。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1213003A
公开(公告)日：1999-04-07
申请号：CN97119714.8
申请日：1997-09-30
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明提供一种蛋白质工程的定点突变方案及其SM33 GI的突变体酶和双突变体酶,其特征在于将SM33 GI的247位或在同源性比较相当于247位的Gly替换为Asp,获得的突变体酶SM33 GI G247D,其酶活较野生型粗酶GI有明显的提高;再将带有Asp247的SM 33 GI基因片段替代SM33 GI GI38P基因的相应片段,可获得双突变体酶SM33GI(GI38P,G247D),其酶活和热稳定性同时获得提高。
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公开(公告)号：CN1945332B
公开(公告)日：2011-11-30
申请号：CN200610096266.6
申请日：2006-10-01
Applicant: 中国科学技术大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明测定DNA链上嘧啶二聚体含量的方法，特征是将末端经生物素修饰的带有一个嘧啶二聚体的探针DNA固定到芯片表面；制备嘧啶二聚体标准品；将0～80nm嘧啶二聚体标准品与0.2～5μg/ml嘧啶二聚体抗体混合，将表面等离子共振传感器检测混合液流过芯片表面的响应值对嘧啶二聚体浓度作图得标准曲线；将待测样品与建立标准曲线相同浓度的抗体混合，检测混合液流过芯片表面的响应值，即可据标准曲线得出样品中嘧啶二聚体的浓度。本发明检测快速，定量准确，重现性好；芯片可以重复使用，检测成本低；可检测的样品范围广；可用于光修复酶活性的检测、研究紫外线对DNA的损伤、DNA损伤修复，及评价臭氧层破坏对人体健康的影响。
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公开(公告)号：CN1624118A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200310106550.3
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的纯化制备方法，特征是先利用基因工程方法获得带有组氨酸－标签的大肠杆菌DNA光修复酶，经镍离子亲和层析柱亲和层析，可一步纯化制备得到近90％纯度的DNA光修复酶，克服了现有纯化方法步骤繁杂、周期长、后处理麻烦、纯化过程中蛋白质易丢失或时间长引起蛋白质变性的缺陷；采用的镍离子亲和层析柱基质价格相对便宜，分离效果好，适用于DNA光修复酶产业化制备。本发明提出的采用高效液相色谱法检测DNA光修复酶的活性，可克服现有活性检测方法对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷。本发明为预防和治疗紫外线对人体的伤害开辟了新的途径，并为紫外线防护产业展示了新的前景。
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公开(公告)号：CN1156182A
公开(公告)日：1997-08-06
申请号：CN95112782.9
申请日：1995-11-27
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明利用蛋白质工程的定点突变方法改良葡萄糖异构酶，提供了一种获得热稳定性提高的GI有意义突变体的突变方案，其特征在于将GI的138位Gly或某些GI中在同源性比较上相当于SM33 GI Gly138的Gly替换成Pro，采用本方法获得的SM33 GI的突变体酶GIG138P，其热失活半衰期比野生型GI提高了0.9-1.1倍，最适反应温度提高了10-12℃，比活与野生型酶相当，它是热稳定性和最适反应温度同时获得改善的有意义突变体。
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公开(公告)号：CN1274818C
公开(公告)日：2006-09-13
申请号：CN200310106550.3
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的纯化制备方法，特征是先利用基因工程方法获得带有组氨酸-标签的大肠杆菌DNA光修复酶，经镍离子亲和层析柱亲和层析，可一步纯化制备得到近90%纯度的DNA光修复酶，克服了现有纯化方法步骤繁杂、周期长、后处理麻烦、纯化过程中蛋白质易丢失或时间长引起蛋白质变性的缺陷；采用的镍离子亲和层析柱基质价格相对便宜，分离效果好，适用于DNA光修复酶产业化制备。本发明提出的采用高效液相色谱法检测DNA光修复酶的活性，可克服现有活性检测方法对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷。本发明为预防和治疗紫外线对人体的伤害开辟了新的途径，并为紫外线防护产业展示了新的前景。
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