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公开(公告)号：CN1274818C
公开(公告)日：2006-09-13
申请号：CN200310106550.3
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的纯化制备方法，特征是先利用基因工程方法获得带有组氨酸-标签的大肠杆菌DNA光修复酶，经镍离子亲和层析柱亲和层析，可一步纯化制备得到近90%纯度的DNA光修复酶，克服了现有纯化方法步骤繁杂、周期长、后处理麻烦、纯化过程中蛋白质易丢失或时间长引起蛋白质变性的缺陷；采用的镍离子亲和层析柱基质价格相对便宜，分离效果好，适用于DNA光修复酶产业化制备。本发明提出的采用高效液相色谱法检测DNA光修复酶的活性，可克服现有活性检测方法对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷。本发明为预防和治疗紫外线对人体的伤害开辟了新的途径，并为紫外线防护产业展示了新的前景。
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公开(公告)号：CN1272446C
公开(公告)日：2006-08-30
申请号：CN200310106548.6
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的活性检测方法，特征是：将DNA光修复酶与含胸腺嘧啶二聚体的DNA底物经近紫外照射不同时间的相应产物经分子-排阻高效液相色谱分析，在线检测底物单峰的260nm紫外吸收，根据底物所出的峰，计算峰面积及其变化值，即胸腺嘧啶二聚体的解聚程度，根据胸腺嘧啶二聚体解聚程度和时间比确定DNA光修复酶的活性；该方法操作简单，可方便地利用操作和分析软件对变化前后的DNA底物进行定量，结果可信度高，克服了现有技术对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷，适合于DNA光修复酶的实验室纯化和其产业化制备过程中的活性检测。
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公开(公告)号：CN1624151A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200310106548.6
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的活性检测方法，特征是：将DNA光修复酶与含胸腺嘧啶二聚体的DNA底物经近紫外照射不同时间的相应产物经分子－排阻高效液相色谱分析，在线检测底物单峰的260nm紫外吸收，根据底物所出的峰，计算峰面积及其变化值，即胸腺嘧啶二聚体的解聚程度，根据胸腺嘧啶二聚体解聚程度和时间比确定DNA光修复酶的活性；该方法操作简单，可方便地利用操作和分析软件对变化前后的DNA底物进行定量，结果可信度高，克服了现有技术对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷，适合于DNA光修复酶的实验室纯化和其产业化制备过程中的活性检测。
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公开(公告)号：CN1624118A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200310106550.3
申请日：2003-12-05
Applicant: 中国科学技术大学
Abstract: 本发明DNA光修复酶的纯化制备方法，特征是先利用基因工程方法获得带有组氨酸－标签的大肠杆菌DNA光修复酶，经镍离子亲和层析柱亲和层析，可一步纯化制备得到近90％纯度的DNA光修复酶，克服了现有纯化方法步骤繁杂、周期长、后处理麻烦、纯化过程中蛋白质易丢失或时间长引起蛋白质变性的缺陷；采用的镍离子亲和层析柱基质价格相对便宜，分离效果好，适用于DNA光修复酶产业化制备。本发明提出的采用高效液相色谱法检测DNA光修复酶的活性，可克服现有活性检测方法对酶底物要求高、步骤繁杂、实验操作难、环境污染的缺陷。本发明为预防和治疗紫外线对人体的伤害开辟了新的途径，并为紫外线防护产业展示了新的前景。
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