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公开(公告)号：CN117286111A
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202310239489.7
申请日：2023-03-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 扬州大学
IPC: C12N7/00 , C12N15/50 , C12N15/64 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N7/01 , C12N5/10 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了牛冠状病毒分离株、稳定表达牛冠状病毒N蛋白细胞系及在构建反向遗传操作系统中的应用。本发明从腹泻犊牛的粪便中分离获得牛冠状病毒内蒙古分离株，该毒株能较好适应细胞传代，在此基础上，采用高效酵母系统构建牛冠状病毒内蒙古分离株的感染性cDNA克隆；本发明还构建了稳定表达牛冠状病毒N蛋白的BHK‑21细胞系。本发明应用所构建的感染性cDNA克隆和BHK‑21细胞系建立了牛冠状病毒内蒙古分离株的反向遗传操作系统，采用该反向遗传系统拯救得到表达外源蛋白的重组牛冠状病毒，为病毒活载体疫苗的研究提供技术平台；还可以拯救得到牛冠状病毒报告病毒，为牛冠状病毒体内、体外复制动态研究提供可视化技术平台。
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公开(公告)号：CN117286111B
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202310239489.7
申请日：2023-03-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 扬州大学
IPC: C12N7/00 , C12N15/50 , C12N15/64 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N7/01 , C12N5/10 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了牛冠状病毒分离株、稳定表达牛冠状病毒N蛋白细胞系及在构建反向遗传操作系统中的应用。本发明从腹泻犊牛的粪便中分离获得牛冠状病毒内蒙古分离株，该毒株能较好适应细胞传代，在此基础上，采用高效酵母系统构建牛冠状病毒内蒙古分离株的感染性cDNA克隆；本发明还构建了稳定表达牛冠状病毒N蛋白的BHK‑21细胞系。本发明应用所构建的感染性cDNA克隆和BHK‑21细胞系建立了牛冠状病毒内蒙古分离株的反向遗传操作系统，采用该反向遗传系统拯救得到表达外源蛋白的重组牛冠状病毒，为病毒活载体疫苗的研究提供技术平台；还可以拯救得到牛冠状病毒报告病毒，为牛冠状病毒体内、体外复制动态研究提供可视化技术平台。
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公开(公告)号：CN117802275A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202410231350.2
申请日：2024-03-01
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。
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公开(公告)号：CN117737069A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202410181708.5
申请日：2024-02-19
IPC: C12N15/113 , C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法，属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选，获得了6种BVDV特异crRNA，并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株；设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列，产物可用于下游CRISPR反应；本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合，建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法，所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。
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公开(公告)号：CN118308312A
公开(公告)日：2024-07-09
申请号：CN202410732718.3
申请日：2024-06-07
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 一种表达报告基因的重组阿卡斑病毒及构建方法和应用，属于重组病毒技术领域。本发明为了解决现有技术中报告基因的插入会导致弱病毒的复制，以及报告基因丢失的技术问题，提供一种表达报告基因的重组阿卡斑病毒，所述重组阿卡斑病毒由下述组分组成：携带分子标签的AKAV‑S基因节段、AKAV‑M基因节段、AKAV‑L基因节段和报告基因，所述报告基因为mWasabi或Nluc报告基因中的任意一种。本发明所提供的表达报告基因的重组阿卡斑病毒，具有较好的遗传稳定性，能够稳定传代；通过引入mWasabi或Nluc报告基因，实现了评价病毒复制水平的指标和相对变化，以及可视化的目的，可应用于对阿卡斑病毒感染进行实时动态示踪，将成为阿卡斑病毒致病机理研究的重要手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116694578A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310482267.8
申请日：2023-04-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了稳定表达T7聚合酶细胞系、轮状病毒反向遗传系统及其构建方法和应用。本发明从新生犊牛腹泻粪便中分离获得两株牛轮状病毒分离株并进一步构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系，其微生物保藏编号是：CGMCC No.45342；在此基础上建立了轮状病毒的反向遗传操作系统并拯救了牛轮状病毒分离株、疫苗株BLR株以及表达ZsGreen的报告病毒株，仅需构建牛轮状病毒株的全基因组的11质粒、不依赖辅助质粒即高效拯救病毒，拯救效率达100％。本发明应用所构建反向遗传操作系统对猴轮状病毒株、猪轮状病毒株和人轮状病毒株进行拯救，均能拯救获得相应的病毒，表明本发明建立的轮状病毒反向遗传系统具有毒株广谱性。
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公开(公告)号：CN117737069B
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410181708.5
申请日：2024-02-19
IPC: C12N15/113 , C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法，属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选，获得了6种BVDV特异crRNA，并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株；设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列，产物可用于下游CRISPR反应；本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合，建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法，所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。
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公开(公告)号：CN117802275B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202410231350.2
申请日：2024-03-01
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。
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公开(公告)号：CN105382357B
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201510892188.X
申请日：2015-11-27
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种超声频振动复合微细放电及电解加工装置，属于复合精密、微细特种加工技术领域。本发明中工具电极与工件均被施加以一定频率的超声频振动，有效提高工件的加工效率；超声振动装置结构对称增加了工件加工的稳定性，工件被超声振动装置辅助以超声振动，有助于电加工的横纵向加工；本发明的进给机构优选伺服电机带动工作台机构在滚珠丝杠导轨上微细移动进给，进给机构可联动微细进给，可实现工件的复杂曲面加工。本发明结构新颖，有效提高电加工的加工效率与精度，解决了超声复合电加工在加工深径比大的工件时效率低下，以及很难加工复杂异形面的缺陷。
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公开(公告)号：CN101973945B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010534295.2
申请日：2010-11-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C07D241/12
Abstract: 四苯基吡嗪或四对氯苯基吡嗪的合成方法，涉及一类化合物的合成方法，常温下，在反应容器中将卡宾催化剂、三乙胺和极性溶剂搅拌混合；在混合液中加入有机醛，加热搅拌或微波辐射；在空气中加热至回流得安息香酮；在回流得到的安息香酮中加入醋酸铵，搅拌均匀；加热或微波辐射；将溶液与冰水混合，抽滤出固体，再用乙醇重结晶，即得四芳基吡嗪类化合物。本发明采用环境友好的催化剂，溶剂成本较低且对环境无害的溶剂，同时四取代吡嗪的产率较高；步骤2和5中可以采取简单的微波辐射的方法代替常规加热，这样可以缩短反应时间，降低能耗，提高合成效率。本发明还可节约生产投入设备，节约生产成本。
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