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公开(公告)号：CN118308291B
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202410741854.9
申请日：2024-06-11
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株及制备方法与应用，属于生物医学技术领域。本发明通过筛选获得一种牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株，解决了目前MDBK‑野生型细胞株培养的BVDV病毒的复制滴度有限，生产效率低，成本较高的问题。所述牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株命名为牛源肾脏传代细胞系MDBK‑C14，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.45823，保藏时间为2024年3月4日。本发明所述的牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株能够大幅度提高牛病毒性腹泻病毒的复制滴度，可应用于牛病毒性腹泻病毒疫苗种毒生产，从而降低成本。
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公开(公告)号：CN117737069A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202410181708.5
申请日：2024-02-19
IPC: C12N15/113 , C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法，属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选，获得了6种BVDV特异crRNA，并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株；设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列，产物可用于下游CRISPR反应；本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合，建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法，所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。
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公开(公告)号：CN116785420B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202311047976.X
申请日：2023-08-21
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 北京荷牧生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开一种牛病毒性腹泻病毒的mRNA疫苗及其应用，属于核酸疫苗技术领域。为了提高牛病毒性腹泻病毒mRNA疫苗的免疫保护作用。本发明提供一种牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea Virus）的mRNA疫苗，所述mRNA疫苗编码牛病毒性腹泻病毒的E2蛋白或牛病毒性腹泻病毒截短E2蛋白。实现了对牛病毒性腹泻病毒的免疫效果的提升。
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公开(公告)号：CN118460479A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310072836.1
申请日：2023-02-07
Applicant: 哈尔滨维科生物技术有限公司 , 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种MDBK悬浮细胞株的应用、牛冠状病毒及其培养方法和牛冠状病毒灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。本发明为解决目前使用贴壁细胞对牛冠状病毒进行增殖培养时，采用的是传统贴壁培养，耗时耗力，工艺繁琐的问题以及细胞活率低导致牛冠状病毒不能稳定增殖的问题。所述MDBK悬浮细胞株可以在无血清培养基中使用摇瓶或生物反应器进行扩大培养，获得细胞悬液后接种牛冠状病毒，获得病毒培养液。本发明提供的病毒培养液可用于制备牛冠状病毒灭活疫苗，同时本发明还提供了一种牛冠状病毒灭活疫苗的制备方法，制备出的牛冠状病毒灭活疫苗能够有效预防新生犊牛感染牛冠状病毒。
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公开(公告)号：CN117286111B
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202310239489.7
申请日：2023-03-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 扬州大学
IPC: C12N7/00 , C12N15/50 , C12N15/64 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N7/01 , C12N5/10 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了牛冠状病毒分离株、稳定表达牛冠状病毒N蛋白细胞系及在构建反向遗传操作系统中的应用。本发明从腹泻犊牛的粪便中分离获得牛冠状病毒内蒙古分离株，该毒株能较好适应细胞传代，在此基础上，采用高效酵母系统构建牛冠状病毒内蒙古分离株的感染性cDNA克隆；本发明还构建了稳定表达牛冠状病毒N蛋白的BHK‑21细胞系。本发明应用所构建的感染性cDNA克隆和BHK‑21细胞系建立了牛冠状病毒内蒙古分离株的反向遗传操作系统，采用该反向遗传系统拯救得到表达外源蛋白的重组牛冠状病毒，为病毒活载体疫苗的研究提供技术平台；还可以拯救得到牛冠状病毒报告病毒，为牛冠状病毒体内、体外复制动态研究提供可视化技术平台。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117737069B
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410181708.5
申请日：2024-02-19
IPC: C12N15/113 , C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法，属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选，获得了6种BVDV特异crRNA，并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株；设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列，产物可用于下游CRISPR反应；本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合，建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法，所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。
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公开(公告)号：CN117802275B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202410231350.2
申请日：2024-03-01
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。
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公开(公告)号：CN117646032B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202410114328.X
申请日：2024-01-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: BHV‑1的反向遗传操作系统及其在病毒拯救中的应用，属于病毒遗传操作技术领域。为解决现有BHV‑1的基因编辑方法存在效率低、耗时长、重组病毒纯化困难等问题，本发明通过将BHV‑1基因组剪切后分段克隆入Fosmid粘粒载体pCC1Fos，构建了BHV‑1基因组Fosmid文库；在对该文库进行基因组测序的基础上，从中挑选出5个克隆有BHV‑1基因组片段，且相互含有重叠区域，并可以拼接覆盖BHV‑1全基因组的重组粘粒；用这5个粘粒共转染人胚胎肾细胞，成功拯救BHV‑1，获得了BHV‑1的反向遗传操作系统。
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公开(公告)号：CN117802275A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202410231350.2
申请日：2024-03-01
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。
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公开(公告)号：CN117646032A
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202410114328.X
申请日：2024-01-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: BHV‑1的反向遗传操作系统及其在病毒拯救中的应用，属于病毒遗传操作技术领域。为解决现有BHV‑1的基因编辑方法存在效率低、耗时长、重组病毒纯化困难等问题，本发明通过将BHV‑1基因组剪切后分段克隆入Fosmid粘粒载体pCC1Fos，构建了BHV‑1基因组Fosmid文库；在对该文库进行基因组测序的基础上，从中挑选出5个克隆有BHV‑1基因组片段，且相互含有重叠区域，并可以拼接覆盖BHV‑1全基因组的重组粘粒；用这5个粘粒共转染人胚胎肾细胞，成功拯救BHV‑1，获得了BHV‑1的反向遗传操作系统。
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