公开(公告)号：CN118086523A

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202410264515.6

申请日：2024-03-08

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心) ,  山东省滨州畜牧兽医研究院

Inventor： 闫鸿斌 ,  曲光刚 ,  李立 ,  王长江 ,  贾万忠 ,  田凤荣 ,  吴燕涛 ,  吴耀东 ,  张念章 ,  李文卉 ,  付宝权

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种用于同时检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的成套引物探针组及其应用。本发明设计并筛选了可用于实时荧光RPA检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的成套引物探针组，建立了一种基于荧光RPA技术的双重快速检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的方法。通过实验证明：本发明方法可以同时检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫两种病原，操作简便、快速，能够在20分钟内进行常温下的单分子核酸检测，大大提高了检测效率，节约了检测时间及检测成本，且特异性强、灵敏度高(灵敏度可达10copies/μL DNA样本)、实验重复性好，适用于现场高通量样品快速检测，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。

公开(公告)号：CN110846309B

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN201810947518.4

申请日：2018-08-20

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 贾万忠 ,  吴燕涛 ,  闫鸿斌 ,  李立 ,  朱国强 ,  李秀荣 ,  李双男 ,  姚刚 ,  付宝权

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定多房棘球绦虫引物对、引物探针组以及他们的应用。本发明提供了特异引物对，由序列2所示单链DNA分子和序列3所示单链DNA分子组成。本发明还保护引物探针组，由特异引物对和特异探针组成；特异探针自上游至下游依次由如下元件组成：区段甲、四氢呋喃和区段乙；区段甲如序列4所示，且3’末端第2位核苷酸被荧光基团修饰；区段乙如序列5所示，且5’末端第2位核苷酸被淬灭基团修饰，且3’末端进行C3 Spacer修饰。特异引物对或引物探针组可用于：鉴定多房棘球绦虫；鉴定待测样本中是否含有多房棘球绦虫。本发明提供特异引物对或引物探针组用于鉴定多房棘球绦虫，操作简便、快速、特异性强、灵敏度高。

公开(公告)号：CN112250748A

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN202011050126.1

申请日：2020-09-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 贾万忠 ,  闫鸿斌 ,  李立 ,  郭爱民 ,  李建秋 ,  李文静 ,  李文卉 ,  李乐 ,  张林生 ,  张念章 ,  付宝权

IPC: C07K14/435 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提供一种细粒棘球蚴免疫原性蛋白EG95基因组成型表达载体，且提供含有该表达载体的毕赤酵母基因工程菌。申请人成功在毕赤酵母组成型表达系统中实现了EG95蛋白的分泌性表达，经三角瓶摇床表达的蛋白浓度达到0.5g/L，目的蛋白纯度达到90％以上。经Westernblotting试验证实，表达的重组蛋白与现有羊棘球蚴病EG95亚单位疫苗免疫阳性血清具有良好的反应原性和特异性(与其他重组蛋白抗体无反应)。本发明从构建的p‑GAPZαA‑Eg95重组质粒转化毕赤酵母SMD1168中筛选出可以高效稳定地分泌表达EG95重组蛋白的工程菌，且不需使用诱导剂，显著降低了生产周期、生产成本和生产的复杂性。

公开(公告)号：CN105420237A

公开(公告)日：2016-03-23

申请号：CN201510566188.0

申请日：2015-09-08

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 贾万忠 ,  刘聪暖 ,  娄忠子 ,  闫鸿斌 ,  李立 ,  付宝权 ,  李文卉 ,  张念章

IPC: C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一个靶向抑制小鼠白细胞介素17A的siRNA-180序列，siRNA-180的序列为SEQ.No.1。本发明的有益效果为：本发明提供的一个靶向抑制小鼠白细胞介素17A的siRNA-180序列，通过相关实验结果表明，其可以抑制小鼠细胞介素17A基因的表达，同时，相关实验结果提示，序列siRNA-180可用于抑制由小鼠细胞介素17A基因的表达引起的病理损伤，并能调节与之相关的细胞因子的表达，达到治愈疾病的目的。

公开(公告)号：CN103173554B

公开(公告)日：2014-06-11

申请号：CN201310102181.4

申请日：2013-03-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 娄忠子 ,  贾万忠 ,  闫鸿斌 ,  李宏民 ,  李立 ,  范彦雷 ,  倪兴维

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开一种用于检测细粒棘球绦虫，多房棘球绦虫和石渠棘球绦虫的试剂盒。本发明的检测试剂盒中分别有三对针对三种病原的特异性扩增引物。利用本发明的试剂盒中的三对引物，通过复合PCR方法可用于分型检测三种病原的单独或混合感染，根据扩增产物电泳中出现的特定条带可确定被检测样品是否感染棘球绦虫。

公开(公告)号：CN112014556A

公开(公告)日：2020-12-01

申请号：CN202010771238.X

申请日：2020-08-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 闫鸿斌 ,  贾万忠 ,  李立 ,  李文卉 ,  张念章 ,  付宝权 ,  李建秋 ,  刘百林 ,  李乐 ,  李文静 ,  何智宇 ,  郭爱民

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N33/53 ,  C07K14/435 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原制备过程中在EG95基因采用Xho I和EcoRⅠ同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA-Eg95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌，连续经含100μg/mL和200μg/mL Zeocin的YPD培养基筛选，然后经甘油诱导表达。本发明采用真核表达系统获得的重组蛋白EG95用于创制牛棘球蚴病抗体检测试剂盒，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作优点。

公开(公告)号：CN110527730A

公开(公告)日：2019-12-03

申请号：CN201810516496.6

申请日：2018-05-25

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 贾万忠 ,  吴燕涛 ,  闫鸿斌 ,  李立 ,  朱国强 ,  李双男 ,  姚刚 ,  田文俊

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种基于RPA技术的石渠棘球绦虫检测试剂盒及其应用。本发明根据石渠棘球绦虫线粒体基因序列设计并筛选了一套可用于RPA检测的引物及探针组合，建立了石渠棘球绦虫特异性实时荧光RPA检测方法。该方法采用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引物与模板的特异性结合，在DNA聚合酶的作用下延伸引物生成新的DNA链。本发明的石渠棘球绦虫特异性荧光RPA检测方法操作简便、快速、特异性强，适用于现场快速检测。

公开(公告)号：CN107831319A

公开(公告)日：2018-03-23

申请号：CN201711367335.7

申请日：2017-12-18

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 闫鸿斌 ,  贾万忠 ,  李立 ,  付宝权 ,  李文卉 ,  张念章 ,  吴燕涛

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原Eg95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原制备过程中在Eg95基因的前后分别连接了His标签序列和Myc标签序列，然后采用EcoR I和Xho I同时酶切PCR产物和真核表达载体pPIC9K，胶回收目的片段和载体后进行连接，构建重组质粒pPIC9K-(His-Eg95-Myc)，再将重组质粒转化到毕赤酵母GS115菌，经甲醇诱导表达，经Ni-NTA纯化。本发明采用双标签序列和真核表达载体系统获得的羊棘球蚴病抗体检测试剂盒抗体，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作的优点。

公开(公告)号：CN105420236A

公开(公告)日：2016-03-23

申请号：CN201510566140.X

申请日：2015-09-08

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 贾万忠 ,  刘聪暖 ,  娄忠子 ,  闫鸿斌 ,  李立 ,  付宝权 ,  李文卉 ,  张念章

IPC: C12N15/113 ,  A61K48/00 ,  A61P1/16

Abstract: 本发明公开了一个靶向抑制小鼠白细胞介素17A的siRNA-288序列，siRNA-288的序列为SEQ.No.1。本发明的有益效果为：本发明提供的一个靶向抑制小鼠白细胞介素17A的siRNA-288序列，通过相关实验结果表明，其可以抑制小鼠细胞介素17A基因的表达，同时，相关实验结果提示，序列siRNA-288可用于抑制由小鼠细胞介素17A基因的表达引起的病理损伤，并能调节与之相关的细胞因子的表达，达到治愈疾病的目的。

公开(公告)号：CN104782583A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201510212551.9

申请日：2015-04-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  中国科学院遗传与发育生物学研究所

Inventor： 贾万忠 ,  李立 ,  陈冰 ,  肖志峰 ,  戴建武 ,  闫鸿斌 ,  娄忠子

IPC: A01K67/033

CPC classification number: A01K67/033

Abstract: 本发明公开了一种棘球蚴体外三维培养模型及其应用。本发明所提供的用于培养棘球蚴的模型，包括培养池和设于所述培养池内的三维胶原支架；所述三维胶原支架上负载有饲养细胞；所述饲养细胞为原代肝实质细胞和骨髓间充质干细胞；所述培养池内含有生物培养液；所述生物培养液为用于培养所述棘球蚴和所述饲养细胞的溶液。利用本发明公开的棘球蚴体外三维培养模型可以研究棘球蚴的发育过程，并且利用该模型可对三维胶原支架中的宿主细胞和寄生虫组织细胞进行免疫荧光染色观察、电镜检测及RT-PCR分析，实现棘球蚴体外长期培养及发育相关研究，与现有的棘球蚴培养模型相比，具有显著的进步。