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公开(公告)号：CN100354424C
公开(公告)日：2007-12-12
申请号：CN200310113562.9
申请日：2003-11-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高温木聚糖酶的表达方法及其专用表达载体。本发明所提供的耐高温木聚糖酶表达载体，是含有耐高温木聚糖酶基因mxynB(64)的重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-mxynB(64)。本发明所提供的表达耐高温木聚糖酶的方法，是将重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-mxynB(64)转化到毕赤酵母中，得到阳性克隆，诱导培养所述阳性克隆，表达耐高温木聚糖酶。本发明的木聚糖酶分泌量达207mg/L培养液，酶活达522U/mg(蛋白)。该木聚糖酶的最适作用温度为90℃，在沸水浴中处理30分钟后，酶活力仍能保持最高酶活力的70%，该酶活性在90℃检测时，其pH值稳定性在6.2～10.0范围内。本发明的方法在耐高温木聚糖酶的生产中具有广阔的工业前景。
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公开(公告)号：CN100400665C
公开(公告)日：2008-07-09
申请号：CN200510082992.8
申请日：2005-07-08
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种组成型表达载体及其应用。该组成型表达载体依次含有PMA1启动子序列，多形汉逊酵母rDNA序列，酿酒酵母α因子前导肽序列编码基因，毕赤酵母醇氧化酶基因终止序列和耐高温木聚糖酶基因；所述PMA1启动子的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，多形汉逊酵母rDNA序列的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，酿酒酵母α因子前导肽序列编码基因的碱基序列如SEQ ID NO：3所示。表达耐高温木聚糖酶的方法，是培养含有上述组成型表达载体的多形汉逊酵母菌株72-80小时，得到耐高温木聚糖酶。
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公开(公告)号：CN1724672A
公开(公告)日：2006-01-25
申请号：CN200510082992.8
申请日：2005-07-08
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种组成型表达载体及其应用。其目的是提供一种可在汉逊酵母中组成型表达外源基因的组成型表达载体及利用该组成型表达载体表达耐高温木聚糖酶的方法。该组成型表达载体是含有PMA1启动子序列，多形汉逊酵母rDNA序列和分泌信号肽编码基因序列的真核细胞表达载体。表达耐高温木聚糖酶的方法，包括以下步骤：1)将耐高温木聚糖酶编码基因插入权利要求1、2或3所述的组成型表达载体中，得到耐高温木聚糖酶组成型表达载体；2)将所述耐高温木聚糖酶组成型表达载体导入多形汉逊酵母中，得到表达耐高温木聚糖酶的工程菌；3)培养所述工程菌72－80小时，得到耐高温木聚糖酶。
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公开(公告)号：CN1544640A
公开(公告)日：2004-11-10
申请号：CN200310113562.9
申请日：2003-11-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高温木聚糖酶的表达方法及其专用表达载体。本发明所提供的耐高温木聚糖酶表达载体，是含有耐高温木聚糖酶基因xynB(64)的重组毕赤酵母表达载体pPIC9K－xynB(64)。本发明所提供的表达耐高温木聚糖酶的方法，是将重组毕赤酵母表达载体pPIC9K－xynB(64)转化到毕赤酵母中，得到阳性克隆，诱导培养所述阳性克隆，表达耐高温木聚糖酶。本发明的木聚糖酶分泌量达207mg/L培养液，酶活达522U/mg(蛋白)。该木聚糖酶的最适作用温度为90℃，在沸水浴中处理30分钟后，酶活力仍能保持最高酶活力的70％，该酶活性在90℃检测时，其pH值稳定性在6.2～10.0范围内。本发明的方法在耐高温木聚糖酶的生产中具有广阔的工业前景。
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