公开(公告)号：CN109312328B

公开(公告)日：2022-06-14

申请号：CN201780038352.8

申请日：2017-06-19

Applicant: 东亚DKK株式会社

Inventor： 野田健一 ,  八幡悟史 ,  下村亚依

IPC: C12N15/09 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N9/02 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明提供一种突变型甲虫荧光素酶等，其在编码野生型甲虫荧光素酶的氨基酸序列中，具有以下突变：与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中、第288位的缬氨酸相当的氨基酸突变为异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸；与其中第376位的亮氨酸相当的氨基酸突变为脯氨酸；与其中第455位的谷氨酸相当的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；或者与其中第488位的谷氨酸相当的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或者苯丙氨酸，并且在0.9质量％的氯化钠溶液中由荧光素－荧光素酶发光反应产生的发光强度是在不含氯化钠的溶液中该反应的发光强度的50％以上。

公开(公告)号：CN109312328A

公开(公告)日：2019-02-05

申请号：CN201780038352.8

申请日：2017-06-19

Applicant: 东亚DKK株式会社

Inventor： 野田健一 ,  八幡悟史 ,  下村亚依

IPC: C12N15/09 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N9/02 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明提供一种突变型甲虫荧光素酶等，其在编码野生型甲虫荧光素酶的氨基酸序列中，具有以下突变：与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中、第288位的缬氨酸相当的氨基酸突变为异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸；与其中第376位的亮氨酸相当的氨基酸突变为脯氨酸；与其中第455位的谷氨酸相当的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；或者与其中第488位的谷氨酸相当的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或者苯丙氨酸，并且在0.9质量％的氯化钠溶液中由荧光素－荧光素酶发光反应产生的发光强度是在不含氯化钠的溶液中该反应的发光强度的50％以上。

公开(公告)号：CN115572755A

公开(公告)日：2023-01-06

申请号：CN202210690960.X

申请日：2022-06-17

Applicant: 东亚DKK株式会社

Inventor： 八幡悟史 ,  野田健一 ,  下村亚依

IPC: C12Q1/66 ,  G01N21/76

Abstract: 本发明提供一种能够消除各试剂盒不同的背景发光的影响而再现性良好地测定内毒素浓度的内毒素测定方法。该内毒素测定方法中，将试样液、由内毒素激活的试剂、通过激活了的试剂使发光基质游离的发光合成基质、使游离出的发光基质发光的发光酶混合而制备测定液，对在制备了所述测定液后经过了第1时间T1时的第1发光量L1和经过了第2时间T2时的第2发光量L2进行测定，根据所述第1发光量L1和所述第2发光量L2，求得基于内毒素的净发光量LX，根据求得的净发光量LX，求得试样液中的内毒素浓度。

公开(公告)号：CN115074338A

公开(公告)日：2022-09-20

申请号：CN202210230083.8

申请日：2022-03-10

Applicant: 东亚DKK株式会社

Inventor： 野田健一 ,  八幡悟史 ,  下村亚依

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明的目的在于提供一种突变型甲虫荧光素酶，其不易受到NaCl的发光抑制的影响。本发明的突变型甲虫荧光素酶在编码野生型甲虫荧光素酶的氨基酸序列中，具有以下突变：与野生型平家萤荧光素酶的氨基酸序列中的第294位苯丙氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸或与第533位天冬氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸，且在0.9质量％的NaCl溶液中由荧光素‑荧光素酶发光反应产生的发光强度是在不含NaCl的溶液中该反应的发光强度的50％以上。

公开(公告)号：CN115074338B

公开(公告)日：2024-08-13

申请号：CN202210230083.8

申请日：2022-03-10

Applicant: 东亚DKK株式会社

Inventor： 野田健一 ,  八幡悟史 ,  下村亚依

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明的目的在于提供一种突变型甲虫荧光素酶，其不易受到NaCl的发光抑制的影响。本发明的突变型甲虫荧光素酶在编码野生型甲虫荧光素酶的氨基酸序列中，具有以下突变：与野生型平家萤荧光素酶的氨基酸序列中的第294位苯丙氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸或与第533位天冬氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸，且在0.9质量％的NaCl溶液中由荧光素‑荧光素酶发光反应产生的发光强度是在不含NaCl的溶液中该反应的发光强度的50％以上。

公开(公告)号：CN104781673A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201380048822.0

申请日：2013-09-19

Applicant: 东亚DKK株式会社 ,  国立大学法人广岛大学

Inventor： 八幡悟史 ,  八谷宏光 ,  黑田章夫 ,  野田健一

IPC: G01N33/579 ,  C12M1/34 ,  C12Q1/66 ,  G01N21/76

CPC classification number: C12Q1/66 ,  C12Q1/008 ,  G01N21/76 ,  G01N33/579 ,  G01N2400/24 ,  G01N2400/50

Abstract: 本发明提供一种可以对生物样本或医药品或食品等含有钠离子的样本进行高灵敏度、高精度的测定的定量方法及定量装置。定量方法包括：校准曲线制作步骤，通过使用将鲎试剂活化的反应和/或ATP与萤光素及萤光素酶的生物化学发光反应的方法，测定以钠离子含量与被测定样本的钠离子含量相等的方式添加钠离子而成的标准液，并制作表示其测定值与测定对象成分的量的关系的校准曲线；样本测定步骤，通过与在所述校准曲线制作步骤中所用的方法相同的方法，测定所述被测定样本；定量步骤，使用所述校准曲线根据所述样本测定步骤中的测定值，求出所述被测定样本中的所述测定对象成分的量。