公开(公告)号：CN108753833B

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN201810525963.1

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  季策 ,  徐行 ,  张秋月 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的notch3基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch3基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch3敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch3基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN108753834B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201810525964.6

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中，培养获得稳定遗传的ddx27基因突变体。另外，本发明还公开了ddx27基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究其生物学功能有重要作用。

公开(公告)号：CN108707628B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201810526041.2

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  徐行 ,  季策 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch2基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白显微注射入斑马鱼胚胎一细胞期中，筛选获得稳定遗传的notch2基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch2基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch2敲除的斑马鱼，为后续基因功能的深入研究提供了实验材料，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN109628454A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910090967.6

申请日：2019-01-30

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 任建峰 ,  黄姣 ,  霍锦倩 ,  刘姣 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/113 ,  A01K67/0276 ,  A01K2207/15 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0362 ,  C12N9/1051 ,  C12N15/902 ,  C12Y204/01011

Abstract: 本发明公开了斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，包括以下步骤：选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点，根据上述靶点序列设计扩增引物，以pUC19‑scaffold plasmid为模板进行PCR扩增，经纯化和体外转录获得gys1和gys2基因敲除靶点gRNA，再将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中，获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。斑马鱼产卵量大，繁殖周期短，胚体透明，有助于进一步研究人类糖原贮积症的发病进程及详细机制。

公开(公告)号：CN108715862A

公开(公告)日：2018-10-30

申请号：CN201810527943.8

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  李伟明

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19--gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7-ddx19-sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物进行纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的ddx19基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，获得可稳定遗传的ddx19基因缺失斑马鱼突变体。另外，本发明还公开了ddx19基因缺失斑马鱼突变体的表型，将为其生物学功能研究以及疾病建模提供基础支持。

公开(公告)号：CN108707629A

公开(公告)日：2018-10-26

申请号：CN201810527945.7

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  郭欣娅 ,  董雪红 ,  岳倩文 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0306 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼notch1b基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch1b基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch1b‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼一细胞期胚胎中，培养获得稳定遗传的notch1b基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch1b基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch1b敲除的斑马鱼，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN108823249A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810527941.9

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  季策 ,  董雪红 ,  张秋月 ,  岳倩文 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了涉及一种CRISPR/Cas9构建notch1a突变体斑马鱼的方法；包括如下步骤：确定notch1a基因敲除的靶点位置；以pUC19-gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7-notch1a-sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼胚胎中，培养获得稳定遗传的notch1a突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择一段独特的打靶区，使得斑马鱼中的notch1a被敲除，又不“误伤”其他基因，形成notch1a基因敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch1a基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路中Notch1a受体的作用意义重大。

公开(公告)号：CN108753834A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810525964.6

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中，培养获得稳定遗传的ddx27基因突变体。另外，本发明还公开了ddx27基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究其生物学功能有重要作用。

公开(公告)号：CN109355313A

公开(公告)日：2019-02-19

申请号：CN201811505111.2

申请日：2018-12-10

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 任建峰 ,  宋诗颖 ,  崔文耀 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种背鳍缺失瓯江彩鲤的制种方法，包括：对瓯江彩鲤进行人工授精和胚胎显微注射，对eomesa1和eomesa2基因同时进行基因敲除，经基因敲除效率检测合格获得基因突变瓯江彩鲤F0嵌合体；待所述瓯江彩鲤F0性成熟后进行内交获得eomesa1和eomesa2双突变纯合体，即背鳍缺失的瓯江彩鲤纯合体；将上述双突变纯合体大规模培育亲鱼并生产，即得背鳍缺失瓯江彩鲤商品鱼；上述方法解决传统选择育种方法中存在基因突变随机且频率很低，可选择的遗传资源少，很难获得目标性状基因突变的问题，可以丰富观赏鱼养殖对象，增加养殖收益。

公开(公告)号：CN108753833A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810525963.1

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  季策 ,  徐行 ,  张秋月 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的notch3基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch3基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch3敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch3基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路意义重大。