公开(公告)号：CN108753834A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810525964.6

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中，培养获得稳定遗传的ddx27基因突变体。另外，本发明还公开了ddx27基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究其生物学功能有重要作用。

公开(公告)号：CN108753834B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201810525964.6

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中，培养获得稳定遗传的ddx27基因突变体。另外，本发明还公开了ddx27基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究其生物学功能有重要作用。

公开(公告)号：CN108715862A

公开(公告)日：2018-10-30

申请号：CN201810527943.8

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  时灿 ,  岳倩文 ,  李伟明

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19--gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7-ddx19-sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物进行纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的ddx19基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，获得可稳定遗传的ddx19基因缺失斑马鱼突变体。另外，本发明还公开了ddx19基因缺失斑马鱼突变体的表型，将为其生物学功能研究以及疾病建模提供基础支持。