公开(公告)号：CN108753833A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810525963.1

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  季策 ,  徐行 ,  张秋月 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的notch3基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch3基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch3敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch3基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN108753833B

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN201810525963.1

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  季策 ,  徐行 ,  张秋月 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的notch3基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch3基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch3敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch3基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN108823249A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810527941.9

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  季策 ,  董雪红 ,  张秋月 ,  岳倩文 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了涉及一种CRISPR/Cas9构建notch1a突变体斑马鱼的方法；包括如下步骤：确定notch1a基因敲除的靶点位置；以pUC19-gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7-notch1a-sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼胚胎中，培养获得稳定遗传的notch1a突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择一段独特的打靶区，使得斑马鱼中的notch1a被敲除，又不“误伤”其他基因，形成notch1a基因敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch1a基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路中Notch1a受体的作用意义重大。