公开(公告)号：CN102286438A

公开(公告)日：2011-12-21

申请号：CN201110207974.3

申请日：2011-07-25

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  何婷婷 ,  管世敏 ,  吕玉涛 ,  丁少南

IPC: C12N9/06 ,  C12R1/25 ,  C12R1/24 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶的生产方法，即将乳酸菌用MRS液体培养基活化培养2～3代后所得的活化菌种用白菜汁与西红柿汁等组成的种子培养基及发酵培养基培养后获得乳酸菌发酵液，将乳酸菌发酵液用氢氧化钠调pH值至6.3-6.5，再添加0.4～0.6mg/mL亚硝酸钠，37℃培养32～48h后得到的乳酸菌亚硝酸盐还原酶发酵液离心分离收集菌体，再进一步破碎菌体细胞，收上清液，再经沉淀、透析、冷冻干燥等步骤最终得到亚硝酸盐还原酶。本发明的一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶的生产方法，不仅生产成本低，而且具有生产工艺简单，操作更加简便等优点。

公开(公告)号：CN102219842A

公开(公告)日：2011-10-19

申请号：CN201110138032.4

申请日：2011-05-26

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  将维 ,  何婷婷

IPC: C07K14/415 ,  C07K1/16 ,  C07K1/14 ,  A23L1/305

Abstract: 本发明公开一种参薯糖蛋白，属于植物化学中植物活性物质领域。该糖蛋白是从参薯原料中制得。制备方法是采用浸提、浓缩、去杂蛋白、醇析得到粗品糖蛋白，经DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-75柱层析纯化、浓缩、再经冷冻干燥步骤得到参薯糖蛋白。本发明参薯糖蛋白中单糖的组成包括L-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖，该参薯糖蛋白的分子量约为12500Da～14500Da。该糖蛋白可用于制做功能性食品和保健品，还可进一步用以研究其生物活性如降血糖、调节免疫力等生理功能。

公开(公告)号：CN102495011A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110376853.1

申请日：2011-11-24

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  何婷婷 ,  高然

IPC: G01N21/31

Abstract: 本发明公开了一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，包括标准曲线的制作、细菌亚硝酸盐还原酶的提取、测定过程中所用的反应混合液的配制、细菌亚硝酸盐还原酶促反应及细菌亚硝酸盐还原酶活性的测定，即通过多孔板和酶标仪测定反应前、后亚硝酸盐溶液吸光值并根据标准曲线可测得酶促反应前、后NaNO2含量，再通过酶活力计算公式计算待测细菌亚硝酸盐还原酶的活力。本发明的一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，在酶促反应后采用多孔板和酶标仪分析方法，即节省分析试剂的用量，同时节省人力和测试时间，大大提高了检测效率。

公开(公告)号：CN102495011B

公开(公告)日：2013-08-14

申请号：CN201110376853.1

申请日：2011-11-24

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  何婷婷 ,  高然

IPC: G01N21/31

Abstract: 本发明公开了一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，包括标准曲线的制作、细菌亚硝酸盐还原酶的提取、测定过程中所用的反应混合液的配制、细菌亚硝酸盐还原酶促反应及细菌亚硝酸盐还原酶活性的测定，即通过多孔板和酶标仪测定反应前、后亚硝酸盐溶液吸光值并根据标准曲线可测得酶促反应前、后NaNO2含量，再通过酶活力计算公式计算待测细菌亚硝酸盐还原酶的活力。本发明的一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，在酶促反应后采用多孔板和酶标仪分析方法，即节省分析试剂的用量，同时节省人力和测试时间，大大提高了检测效率。

公开(公告)号：CN102559715A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201210037774.2

申请日：2012-02-20

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  何婷婷 ,  高然

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/06 ,  C12R1/25 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因，含有该基因的重组载体、用该载体转化的宿主以及利用该转化体生产该基因的表达产物及其应用。即以金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌、布鲁氏杆菌;大肠杆菌的亚硝酸盐还原酶基因为参考，进行引物设计，用植物乳杆菌提取的基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的基因片段，将该片的连接到pET-32a（+）表达载体中，再转入大肠杆菌BL21（DE3）细胞中，经IPTG诱导后，进行植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶(NiRL)蛋白表达，从而获得植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶蛋白。

公开(公告)号：CN102558353A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201110407260.7

申请日：2011-12-09

Applicant: 上海应用技术学院

Inventor： 龚钢明 ,  何婷婷 ,  高然

IPC: C07K16/40 ,  C07K16/06 ,  C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 一种大肠杆菌NrfA基因表达蛋白的多克隆抗体制备方法：以大肠杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到NrfA基因编码区，构建pET-28a（+）-NrfA表达载体，转入大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白；再免疫新西兰雄兔，制备多克隆抗体；免疫获得的多克隆抗体用ELISA检测，其效价为1：204900，经Westernblotting分析，抗体的特异性较好。该多克隆抗体可用于研究其他微生物中亚硝酸盐还原酶与大肠杆菌亚硝酸盐还原酶之间的相关结构与功能。也为进一步深入研究大肠杆菌亚硝酸盐还原酶的作用机理与活性调节提供基础。