一种鼻腔乳头状瘤组织单细胞悬液的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN114149972A

    公开(公告)日:2022-03-08

    申请号:CN202111044626.9

    申请日:2021-09-07

    Abstract: 本发明公开了一种鼻腔乳头状瘤组织的单细胞悬液制备方法及应用,涉及生物检测技术领域,该方法的酶溶液为II型胶原酶、胰蛋白酶、脱氧核糖核酸酶I的无钙镁PBS溶液;该方法包括的步骤为酶解和孵育鼻腔乳头状瘤肿瘤组织,过滤得到细胞悬液,红细胞裂解得到细胞沉淀,清洗得到鼻腔乳头状瘤单细胞悬液。本发明制备得到的鼻腔乳头状瘤单细胞悬液中单细胞活性高,数量充足,且细胞分离度高,有利于进行下游包括高通量单细胞测序、细胞分选后进行单个细胞的测序等实验。

    动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN118562787A

    公开(公告)日:2024-08-30

    申请号:CN202410626437.X

    申请日:2024-05-20

    Inventor: 王慧 何牮 周献超

    Abstract: 本发明公开一种动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的制备方法及应用。用于制备动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的消化体系包括CA‑630、匀浆缓冲液;所述匀浆缓冲液包括Tris缓冲液、无机盐、糖、二硫苏糖醇(DTT),酶抑制剂。CA‑630和匀浆缓冲液配置的消化体系对斑块组织样本进行消化解离处理,再经匀浆缓冲液和细胞核重悬液进行梯度离心以去除钙化碎片等杂质,从而得分离度高的高质量单细胞核悬液。本发明的单细胞核悬液得率高、纯度好、细胞类型丰富,充分还原病理及生理状态下的细胞类型及比例,为鲜离体的、以及已冻存的样本组织提供如单细胞测序、流式分析等多种研究的基础。

    一种通用型高活性小鼠胰腺离体组织单细胞悬液的制备及应用

    公开(公告)号:CN118345026A

    公开(公告)日:2024-07-16

    申请号:CN202410484773.5

    申请日:2024-06-13

    Inventor: 王慧 何牮 周献超

    Abstract: 本发明公开了一种通用型制备高活性的小鼠胰腺离体组织单细胞悬液的方法及多种应用。涉及生物检测技术领域,特别是一种用于制备胰腺导管腺癌小鼠胰腺组织单细胞悬液的方法。由于胰腺导管腺癌的组织结构复杂、细胞紧密相连,传统的细胞分离方法存在困难,影响了单细胞测序技术的准确性和可靠性。为解决这一问题,本发明提供了一种混合酶液,包括IV型胶原酶、Dispase II、胰蛋白酶抑制剂、胎牛血清、DNAse I和细胞培养基,用于制备小鼠胰腺组织单细胞悬液。该方法简单、方便,能够获得高活性、高分散的单细胞悬液,有助于深入研究胰腺导管腺癌的微环境。

    单细胞外显子测序方法及其应用
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN115927568A

    公开(公告)日:2023-04-07

    申请号:CN202211640296.4

    申请日:2022-12-20

    Inventor: 何牮

    Abstract: 本发明公开了一种单细胞外显子测序方法及其应用,该方法包括:S1、肿瘤单细胞分选;S2、将分选的肿瘤单细胞进行MDA扩增,获得基因组文库;S3、检测MDA扩增产物均一性,选择多个位于不同染色体上的位点并设计对应的扩增引物,通过qPCR检测每颗单细胞MDA产物这多个位点的扩增效果,进而确定基因组是否扩增均一;S4、gDNA文库制备:将扩增后的DNA打断为150‑200bp的片段,通过末端修复、加尾、加接头、扩增,获得gDNA文库;S5、外显子捕获及文库构建:将制备好的gDNA文库与特定的探针进行杂交,捕获特定区域后,PCR扩增添加索引标签,获得外显子文库;S6、将外显子文库进行测序。

    肺癌预后标记物及其应用
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN115125301A

    公开(公告)日:2022-09-30

    申请号:CN202210493267.3

    申请日:2022-05-07

    Inventor: 王慧 何牮

    Abstract: 本发明公开了一种肺癌预后标记物及其应用。本发明公开了肺癌患者的癌组织中辣椒素受体TRPV1的基因表达越高,患者的预后越差,通过多因素COX生存分析构建了影响肺癌患者预后的模型,K‑M plot曲线、ROC曲线及患者的生存时间都验证了模型的准确性和特异性。因此该标志物在肺癌中作为预后指标具有的潜在应用价值,可进一步为肺癌患者的个性化治疗选择提供依据,对采取个性化的治疗和降低肺癌死亡率具有重要的意义。

    一种B细胞的生物标志物组及其应用

    公开(公告)号:CN118064589A

    公开(公告)日:2024-05-24

    申请号:CN202410302882.0

    申请日:2024-03-18

    Inventor: 何牮

    Abstract: 本发明涉及一种B细胞的生物标志物组及其应用。本发明利用单细胞转录组分析技术,通过分析肿瘤患者癌和癌旁组织中的B单细胞基因表达谱,分离和表征了能反映机体肿瘤免疫状态的B细胞亚群,即,表达基因Cd83和Irs2的#imgabs0#细胞。并进一步研究确定了,所述细胞亚群表达的新的特征性基因Cd83和Irs2,以及#imgabs1#细胞比例与肿瘤预后之间的关系,可用于肿瘤预后的诊断和监测,以及作为新的肿瘤免疫治疗的靶点。

    一种基于突变蛋白构建的多层次虚拟筛选方法及其应用

    公开(公告)号:CN117854589A

    公开(公告)日:2024-04-09

    申请号:CN202410031308.6

    申请日:2024-01-09

    Inventor: 何牮 刘梓学

    Abstract: 本发明涉及一种基于突变蛋白构建的多层次虚拟筛选,以及筛选抑制剂在预防和/或治疗β‑catenin蛋白介导的恶性肿瘤疾病中的应用。在构建三种突变蛋白的三维结构的基础上,通过分别分析第一次虚拟筛选得到的结合能排名前1%小分子化合物种类,选取黄酮类化合物作为第二次筛选库再次进行虚拟筛选,获得三种突变β‑catenin与黄酮类化合物的对接得分结果,得到排名前1%化合物,进行分子对接与活性研究以验证其抑制效果。本发明通过构建突变蛋白的三维pdb文件获得筛选的受体蛋白,经过多层次的虚拟筛选,自建二次虚拟筛选配体文库,丰富了该种类配体品种,在降低实验筛选化合物数量的同时,有效提升虚拟筛选精确率,缩短研发周期和节约成本,具有治疗和/或预防突变β‑catenin蛋白介导的恶性肿瘤疾病上的应用前景。

    一种预测抗PD-1免疫治疗的肺癌预后标记物及其应用

    公开(公告)号:CN116574805A

    公开(公告)日:2023-08-11

    申请号:CN202310160532.0

    申请日:2023-02-23

    Inventor: 何牮 孟梅 高锐

    Abstract: 本发明公开了一种预测抗PD‑1免疫治疗的肺癌预后标志物及其应用。本发明公开了肺癌患者的癌组织中跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)的基因表达越高,肺腺癌的预后越好,而肺鳞癌的预后越差。并且在与抗PD‑1治疗联合研究中发现,TMPRSS2的表达与对抗PD‑1治疗无响应的肺腺癌患者预后正相关。通过多因素COX生存分析构建了影响肺癌患者预后的模型,K‑M plot曲线,ROC曲线及患者的生存时间都验证了模型的准确性和特异性。因此该标志物在肺癌中作为预测抗PD‑1免疫治疗的肺癌预后指标具有潜在的应用价值,可进一步为肺癌患者的个性化治疗选择提供依据,对采取个性化的治疗和降低肺癌死亡率具有重要的意义。

    一种供移植用皮肤组织单细胞悬液的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN118406636A

    公开(公告)日:2024-07-30

    申请号:CN202410617733.3

    申请日:2024-05-17

    Inventor: 何牮 周献超

    Abstract: 本发明公开了一种供移植用皮肤组织单细胞悬液的制备方法及应用;本发明供移植用皮肤单细胞悬液制备用酶解体系所述酶解体系包括组织酶解液I和组织酶解液II;所述组织酶解液I包括Liberase TL、分散酶、DNAse I;所述组织酶解液II包括胶原酶II、透明质酸酶、DNAse I。所述供移植用皮肤组织的单细胞悬液的制备方法,包括皮肤组织在组织预处理液中预处理的步骤;预处理后的皮肤组织在组织酶解液I和组织酶解液II中进行消化的步骤;S3、消化后的进行红细胞裂解,去除红细胞的步骤;S5、用细胞重悬液重悬去除红细胞的细胞沉淀的步骤。本发明为未来的皮肤再生生物学研究提供了重要的技术支持。

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