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公开(公告)号：CN110951717A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911384932.X
申请日：2019-12-28
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种L-阿拉伯糖差向异构酶突变体，及其在微生物催化D-半乳糖异构化制备D-塔格糖中的应用。所述L-阿拉伯糖差向异构酶突变体，由所示氨基酸经定点突变而得，所述点突变位点为下列中的一个或多个：(1)第304位、(2)第75位、(3)第274位、(4)第167位。本发明有益效果主要体现在：本发明提供了一种全新的L-阿拉伯糖差向异构酶及其突变体，该突变体具有高最适反应温度75℃，其酶活与原始酶相比提高280％。使用本突变体生产D-tagatose，产物得率最高可达73.3％。将重组酶进行固定化并连续催化30批次，转化率均大于73％。该突变体的转化水平展示了优良的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN109609478A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910033474.9
申请日：2019-01-14
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种新型转氨酶及其高活力突变体在制备L-草铵膦中的应用，转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID:5所示，其突变体是将SEQ ID:5所示的氨基酸序列的第124、144、237、250、和328位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明实现高转化率转氨酶活力突变体基因的高效表达，酶活最高为840U/mg。本发明中所述转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化800mM草铵膦前体酮利用无机胺正丁胺不对称合成L-草铵膦中，转化率高达100％。该AcTA突变体解决了当前转氨酶制备L-草铵膦工艺中，酶源少、酶活低、底物耐受性和氨基供体昂贵等技术难题，具有较好应用前景。
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公开(公告)号：CN108977432A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810839980.2
申请日：2018-07-27
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组大肠杆菌固定化细胞及在利用木糖母液生产木糖醇中的应用，所述固定化细胞是将木糖还原酶基因和葡萄糖脱氢酶基因共同导入宿主大肠杆菌，获得含有双酶基因的重组大肠杆菌，然后将重组大肠杆菌进行发酵培养，取湿菌体细胞进行固定化，获得重组大肠杆菌固定化细胞。本发明重组基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pCDFDuet-1-XR-GDH实现了木糖还原酶和葡萄糖脱氢酶双酶共表达，其双酶偶联体系不需要额外的辅酶添加，生产方法简单、高效，时空产率远高于发酵法，木糖母液中木糖转化率达到99％以上，利用葡萄糖为辅底物，该重组细胞催化200g/L木糖，反应30h后，木糖醇产率为100％。
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公开(公告)号：CN108048440A
公开(公告)日：2018-05-18
申请号：CN201810007649.4
申请日：2018-01-04
Applicant: 浙江工业大学
CPC classification number: C12N9/92 , C12P19/02 , C12Y503/01005
Abstract: 本发明公开了一种耐高温葡萄糖异构酶突变体及其在催化D‑葡萄糖异构化制备D‑果糖中的应用，突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第89位、第136位、第352位中的一个或多个进行单突变或多突变获得的。本发明实现高转化率葡萄糖异构酶基因的高效表达，酶活为7.23U/mg。本发明中所述ToGI突变体的最适反应温度为110℃，该催化剂在100℃高温下催化400g/L D‑葡萄糖制备的高果糖浆中，D‑果糖浓度高达61.3％。
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公开(公告)号：CN104342463B
公开(公告)日：2017-08-22
申请号：CN201410395025.6
申请日：2014-08-12
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江手心医药化学品有限公司
Abstract: 本发明公开了一种1‑氰基环己基乙酸的制备方法，首先采用微生物转化的方法对底物1‑氰基环己基乙腈进行催化，然后采用分步分离的方法对转化液进行分离纯化，最终获得了蛋白残留100PPM以下，收率在85％以上，纯度达到98％的产物，很好的解决了后续加氢反应生成加巴喷丁时由于蛋白浓度过高对催化剂产生毒害作用的问题，也提高了加巴喷丁的产量。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111057697B
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN201911378513.5
申请日：2019-12-27
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种具备D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶功能的耐高温TIM barrel蛋白突变体，及其在催化D‑果糖异构化制备D‑阿洛酮糖中的应用。所述TIM Barrel蛋白突变体，由序列如SEQ ID NO.1所示氨基酸经定点突变而得，所述点突变位点为下列中的一个或多个：(1)第241位、(2)第182位、(3)第201位、(4)第105位、(5)第30位。本发明有益效果主要体现在：本发明提供了一种全新的TIM Barrel蛋白酶突变体，该突变体具有超高酶活、较高最适反应温度和底物转化率，解决了现有酶催化制备D‑psicose效率低下的技术难题。使用本突变体生产D‑psicose，产物得率最高可达53.68％，优于原始酶和其他突变酶的转化效果，具有较好工业应用前景。
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公开(公告)号：CN115786319A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211704773.9
申请日：2022-12-29
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种具有较高热稳定性的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其突变体A13S/V235I以及编码基因，以及在微生物催化D‑果糖异构化制备D‑阿洛酮糖中的应用，解决了目前D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶在工业生产中热稳定性差的技术问题。所述D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体由SEQ ID NO.2所示氨基酸经定点突变而得。本发明有益效果主要体现在：本发明提供了一种全新的热稳定性提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其突变体，该突变体具有高最适反应温度70℃，解决了现有酶无法在高温生产或其在高温下迅速失活的阻碍制备D‑psicose的技术难题。热稳定性优于原始酶和其他突变酶，具有较好工业应用前景。
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公开(公告)号：CN113151240B
公开(公告)日：2022-11-04
申请号：CN202110559008.1
申请日：2021-05-21
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种葡萄糖异构酶及其突变体，以及其编码基因，以及其在微生物催化D‑葡萄糖异构化制备高果糖浆F‑55中的应用。本发明提供的高效表达耐高温葡萄糖异构酶的重组大肠杆菌，解决了一般的耐高温葡萄糖异构酶生产高果糖浆F‑55反应温度过高的问题；应用该菌种生产葡萄糖异构酶具有产量高、工艺简单、周期短、便于工业化应用等优点，该菌株可直接用于高果糖浆F‑55的生产，而不需要细胞破碎；发酵培养结束后在80℃条件下对D‑葡萄糖的总酶活达到606.8U/g，D‑葡萄糖的转化率达到67.3％，80℃下保温24h残余酶活为75％，反应平衡时间为2.5h，这为高果糖浆F‑55的工业化大规模生产提供了良好的技术支持。
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公开(公告)号：CN111440785B
公开(公告)日：2022-07-15
申请号：CN202010126502.4
申请日：2020-02-28
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法，所述方法是将含葡萄糖异构酶基因的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体经缓冲液悬浮，制成菌悬液；向菌悬液中添加改性硅藻土，搅拌混匀，加入聚乙烯亚胺，然后再加入戊二醛进行交联，15～35℃搅拌交联0.5～5h后抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤后，粉碎成粒，得到含葡萄糖异构酶的固定化葡萄糖异构酶制剂；本发明所提供的固定化方法具有固定化材料成本低，操作简单，机械强度高，制备的固定化产葡萄糖异构酶重组大肠杆菌全细胞用于催化D‑葡萄糖生产D‑果糖，在60℃条件下，分批次反应重复使用40批次后，仍具有86％以上的残余酶活力；连续反应603h，时空产率为3.8kg/L/d，平均转化率大于42％，具有良好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN113151240A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110559008.1
申请日：2021-05-21
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种葡萄糖异构酶及其突变体，以及其编码基因，以及其在微生物催化D‑葡萄糖异构化制备高果糖浆F‑55中的应用。本发明提供的高效表达耐高温葡萄糖异构酶的重组大肠杆菌，解决了一般的耐高温葡萄糖异构酶生产高果糖浆F‑55反应温度过高的问题；应用该菌种生产葡萄糖异构酶具有产量高、工艺简单、周期短、便于工业化应用等优点，该菌株可直接用于高果糖浆F‑55的生产，而不需要细胞破碎；发酵培养结束后在80℃条件下对D‑葡萄糖的总酶活达到606.8U/g，D‑葡萄糖的转化率达到67.3％，80℃下保温24h残余酶活为75％，反应平衡时间为2.5h，这为高果糖浆F‑55的工业化大规模生产提供了良好的技术支持。
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