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公开(公告)号：CN116064441A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211367012.9
申请日：2022-11-02
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备D‑泛解酸内酯中的应用，所述突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第第28位进行饱和突变获得。本发明构建的RopLPLDH突变体工程菌RopLPLDHA28S及其分子伴侣共表达工程菌RopLPLDHA28S/pGro7的比酶活较对照组RopLPLDH分别提高了0.45倍和0.50倍。RopLPLDH突变体与分子伴侣共表达策略显著提高目的蛋白可溶性表达。其中共表达菌株RopLPLDHA28S/pGro7基本能够完全催化500mM和750mM L‑泛解酸内酯。三酶共表达工程菌pA‑CglCPR/EsGDH‑pET‑RopLPLDH催化200mM底物时，产物L‑泛解酸内酯浓度随时间的推移而逐渐升高，24h时底物转化率达到95.6％。
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公开(公告)号：CN115960931A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202211414127.9
申请日：2022-11-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种高产4‑HBC的分枝杆菌基因工程菌及其构建方法，以及其在微生物发酵制备22‑羟基‑23,24‑双降胆甾‑4‑烯‑3‑酮中的应用。所述高产4‑HBC的分枝杆菌基因工程菌按如下方法构建：以分枝杆菌为底盘菌，依次敲除kshA1、kshA2、kstD1、kstD2、kstD3基因，敲除hsd4A基因，过表达ltp3、ltp4基因，得到所述高产4‑HBC的分枝杆菌基因工程菌。本发明所提供的基因工程菌株可以生产4‑HBC，大大提高甾体药物的生产效率，有助于提高底物的转化率，降低生产成本，且反应条件温和、环境友好，适合于大力推广应用，具有较高的经济效益和社会效益。
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公开(公告)号：CN115896087A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202310056045.X
申请日：2023-01-19
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N11/089 , C12N9/88 , C12P13/12
Abstract: 本发明涉及一种巯基裂解酶‑PLP共固定化酶及其在生物催化O‑琥珀酰‑L‑高丝氨酸制备L‑蛋氨酸中的应用。本发明提供了巯基裂解酶‑PLP共固定化酶，所述共固定化酶的酶活回收>80％；以所述共固定化酶作为生物催化剂进行L‑蛋氨酸的生物催化制备，底物浓度达300g/L，反应3h，底物转化率在85％以上；本发明催化L‑蛋氨酸合成时无需额外辅酶添加，产品产率与纯度高，并且可简化工艺步骤，减少“三废”排放，能够降低生产成本的20％，且具备大规模应用的潜力，在L‑蛋氨酸的工业化生产中具有极高应用价值。
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公开(公告)号：CN115786227A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211650336.3
申请日：2022-12-21
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种产L‑高丝氨酸的重组基因工程菌的构建方法，及其在微生物发酵制备L‑高丝氨酸中的应用。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种产L‑高丝氨酸的重组基因工程菌及其构建方法，以及其在微生物发酵制备L‑高丝氨酸中的应用；利用本发明重组基因工程菌采用发酵法生产L‑高丝氨酸，原料葡萄糖成本低，条件温和，环境友好；采用本发明工程菌，L‑高丝氨酸产量显著提升，具有较好应用前景。
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公开(公告)号：CN115725553A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202211303093.6
申请日：2022-10-24
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种催化性能明显改善的棘白菌素B脱酰基酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其，以及所述突变体在催化合成阿尼芬净医药中间体——棘白菌素B母核中的应用。所述棘白菌素B脱酰基酶突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸经单点突变或多点联合突变获得。本发明以扩大催化底物口袋为基础进行理性设计，利用三维结构模拟结合酶学性质分析，提供了一种催化性能更好的ECB脱酰基酶突变体，可用于阿尼芬净中间体的制备，为阿尼芬净的合成提供了新的途径。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113088503B
公开(公告)日：2023-01-10
申请号：CN202110456745.9
申请日：2021-04-27
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种O‑琥珀酰巯基转移酶突变体及其在L‑甲硫氨酸合成中的应用，本发明以含metZ基因的重组大肠杆菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体提取的粗酶液为催化剂，以O‑琥珀酰‑L‑高丝氨酸为底物，以甲硫醇钠盐为甲硫基供体，合成L‑甲硫氨酸，工业成本较低。在最优体系下，对100‑300mM底物的转化率达达到90％‑95％，与野生型相比较，对底物转化率分别提高了50％‑80％。
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公开(公告)号：CN115386511A
公开(公告)日：2022-11-25
申请号：CN202210913412.9
申请日：2022-07-25
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高产他克莫司低产子囊霉素的筑波链霉菌ZJXM0001及其应用，将筑波链霉菌ZJXM0001接种至发酵培养基，在26‑30℃、180‑240rpm下培养144‑192h，获得含他克莫司的发酵液，发酵液分离纯化，获得他克莫司；本发明通过UV、ARTP诱变和抗性筛选的方法得到一株高产他克莫司且副产物子囊霉素明显降低的筑波链霉菌ZJXM0001菌株；在温度28℃，转速200rpm，培养时间180h下相对原始筑波链霉菌菌株S1，筑波链霉菌ZJXM0001菌株的他克莫司产量提高了236％，低产副产物子囊霉素，在温度26℃，其他条件不变的情况下，较原始菌株提升166％，无子囊霉素产生，本发明方法对于后续的纯化、提取及工业化有着重要的意义。
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公开(公告)号：CN112553294B
公开(公告)日：2022-10-25
申请号：CN202011338441.4
申请日：2020-11-25
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种甾体C1,2位脱氢酶酶活检测方法。甾体C1,2位脱氢酶能够代谢还原WST‑1，同时在PMS的联合作用下生成还原成水溶性的橙黄色甲臢产物，在440nm下测定吸光度，以WST‑1还原量表示脱氢酶活性，根据标准曲线计算橙黄色甲臢的生成量，进而求出甾体C1,2位脱氢酶活性。本发明提供了一种氧化还原酶活力检测方法，特异性强、灵敏度高、操作方便、检测时间短、定量准确，适合高通量的甾体C1,2位脱氢酶活性检测。
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公开(公告)号：CN115161299A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210522265.2
申请日：2022-05-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酿酒酵母来源的醛酮还原酶SceCPR半理性设计及其生物催化应用，属于蛋白质工程领域。本发明通过同源建模、分子比对和分子对接，提供了醛酮还原酶突变体，将序列表中氨基酸序列2所示的第158位丝氨酸突变为丙氨酸SceCPRS158A，获得酶活力提高的醛酮还原酶突变体。SceCPR、SceCPRS158A的比酶活分别为32.62U/mg、119.4U/mg，SceCPRS158A比酶活提高了3.66倍。
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公开(公告)号：CN115109793A
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN202210729498.X
申请日：2022-06-24
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/60 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N9/88 , C12N9/00 , C12N9/02 , C12N9/10 , C12N1/21 , C12P19/44 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种重组大肠杆菌，以大肠杆菌W3110为宿主细胞，通过代谢工程改造提高络缌关键前体L‑Phe，再过表达来源于粘红酵母的苯丙氨酸解氨酶(RgPAL)、链霉菌的肉桂酰CoA连接酶(Sc4CL)、拟南芥的肉桂酰CoA还原酶(AtCCR)和糖苷转移酶(AtUGT73C5)，实现了络缌(Rosin)的从头合成，该菌株在5L发酵罐分批补料发酵后，产量为4.01g/L，是目前报道的最高产量。
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