融合肝素酶及其编码基因与制备方法

    公开(公告)号:CN101608178B

    公开(公告)日:2011-05-18

    申请号:CN200910090166.6

    申请日:2009-07-29

    Applicant: 清华大学

    CPC classification number: C12N9/88 C08B37/0075

    Abstract: 本发明公开了一种融合肝素酶。该融合肝素酶是如下a)或b)的蛋白:a)序列表中序列1的第8-1015所示的氨基酸序列组成的蛋白质;b)在序列表中序列1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且具有肝素酶活性的由a)衍生的蛋白质。上述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围之内。本发明产生的三重融合蛋白的酶活通过摇瓶培养可达1214.4IU/L培养基,比酶活可达2.839IU/mg蛋白。本发明可以利用GFP蛋白实现菌体浓度和酶活的快速在线检测。

    用于培养微生物表达肝素酶的培养基

    公开(公告)号:CN101591633A

    公开(公告)日:2009-12-02

    申请号:CN200810113259.1

    申请日:2008-05-28

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明公开了一种用于培养微生物表达肝素酶的培养基。该培养基,是含有5-20g/L酵母提取物,0.5-20g/L葡萄糖,0.05mM-5.0mM钙离子的培养基。所述培养基中还含有10.0-25.0g/L Na2HPO4·12H2O,1.0-5.0g/L KH2PO4,0.1-1.0g/LNaCl;0.5-5.0g/L NH4Cl。重组肝素酶能够在上述培养基中高量表达,最高的肝素酶酶活达20652.63IU/L发酵液,远远高于普通的LB培养基的表达效果。该培养基大大地降低了肝素酶的生产成本,对于肝素酶的应用,尤其是酶法制备低分子量肝素具有极其显著的经济意义。

    一种微米气泡的发生装置及其专用旋流器

    公开(公告)号:CN101565230A

    公开(公告)日:2009-10-28

    申请号:CN200810104836.0

    申请日:2008-04-24

    Applicant: 清华大学

    CPC classification number: Y02W10/15

    Abstract: 本发明提供了一种微米气泡的发生装置及其专用旋流器。旋流器包括一个中空的通腔体,由圆柱型腔体和位于其上的圆台型腔体组成;圆台型腔体的高、上底面内直径、下底面内直径和圆柱型腔体的高的比例为1∶(0.2-0.4)∶(0.8-1.1)∶(0.28-2.2);圆柱型空腔体侧面设有至少一对通孔;圆柱型空腔体下底面设有通孔(23),圆台型空腔体上底面设有通孔(24)。本发明提供的微米气泡发生装置,由所述的旋流器(2)和水泵(3)通过管路连接而成。本发明装置产生的微米气泡的粒径小于50微米,溶解氧浓度可达超饱和状态,显著提高充氧能力和氧转移效率,在污水处理、河道湖泊污染治理及水产养殖中有良好的应用前景。

    利用白腐真菌和载体处理难降解废水的方法

    公开(公告)号:CN101549936A

    公开(公告)日:2009-10-07

    申请号:CN200910083386.6

    申请日:2009-05-04

    CPC classification number: Y02W30/47

    Abstract: 本发明属于水处理技术领域的一种利用白腐真菌和载体处理难降解废水的方法。先利用载体吸附废水中的COD,后利用载体给白腐真菌提供纤维素刺激性底物诱发其产酶,处理载体吸附的难降解物质,选用不同天然物作为载体的核心材料,经NaOH处理后制成载体包被,处理废水时,调节废水的初始pH、投加载体、加入白腐真菌、取水样到锥形瓶中;置入温度35-60℃、摇速170rpm摇床进行处理。本发明处理过程仅需调节初始pH,中间过程不用操作,无需再次调节即可进行后续处理;且所用的载体来源广泛,使用后可连同菌体直接做肥料处理,不产生二次污染;处理后脱色效果明显,脱色率90%以上。

    一种制备低分子量肝素的方法

    公开(公告)号:CN101294177A

    公开(公告)日:2008-10-29

    申请号:CN200810112768.2

    申请日:2008-05-26

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明公开了一种制备低分子量肝素的方法。该方法,是以肝素为底物,用麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白降解肝素,得到低分子量肝素;所述麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白,是具有序列表中的SEQ ID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质。本发明的方法采用具有较高酶活的麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白制备肝素,通过控制降解反应中的不同吸光度A235时终止反应,得到具有理想平均分子量和分子量分布较窄的,活性较高的低分子量肝素寡糖。

    一种制备低分子量肝素的方法

    公开(公告)号:CN100344769C

    公开(公告)日:2007-10-24

    申请号:CN200510088970.2

    申请日:2005-08-04

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明公开了一种制备低分子量肝素的方法。本发明的制备低分子量肝素的方法,是以肝素为底物,用麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白降解肝素,得到低分子量肝素;所述麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白,是具有序列表中的SEQ ID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质。本发明的方法采用具有较高酶活的麦芽糖结合蛋白-肝素酶I融合蛋白制备肝素,通过控制降解时间,得到具有理想平均分子量和分子量分布较窄的低分子量肝素寡糖。本发明为低分子量肝素的酶法工业化生产提供了新的途径。

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