一种基于分支肽组装的细胞膜碱性磷酸酶原位定量方法

    公开(公告)号:CN119662772A

    公开(公告)日:2025-03-21

    申请号:CN202311218960.0

    申请日:2023-09-20

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明中,我们开发了一种灵敏度高、操作简单的细胞膜碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的定量方法。具体而言,我们设计了磷酸基团与胍基相互作用介导的分支肽组装,该组装结构会因ALP催化多肽去磷酸化而被破坏,从而释放出带电荷的多肽,并导致金纳米颗粒的分散程度发生变化、实现比色信号输出。因此,通过这种肽组装的调控可以将细胞膜上ALP的原位识别转化为定量信号,并且无需逐步的标记以及蛋白质的分离纯化。同时,利用具有分支结构的多肽对信号进行放大,使得本方法具有较高的灵敏度。结果表明,本方法具备对HepG2细胞膜上低至34 pg/cell ALP进行定量测定的能力,并且,通过量化细胞膜ALP的表达水平,本方法能够对6种不同细胞系进行区分。

    一种基于多肽整流器修饰的纳米通道传感器

    公开(公告)号:CN116008367A

    公开(公告)日:2023-04-25

    申请号:CN202111237310.1

    申请日:2021-10-22

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于多肽整流器修饰的纳米通道传感器,在阳极氧化铝膜的纳米通道表面修饰多肽,构建整流反转装置,用于蛋白酶的检测,同时也为酶活性的测定以及其抑制剂的筛选开辟了一个新的途径。在本发明中,我们将功能性多肽引入到阳极氧化铝材料的纳米通道中,作为离子整流器来调节离子电流整流(ICR)方向,并监测其反转电流以作为输出信号。在一定的pH值下,不同等电点的多肽序列使得通道表面电荷的正负发生转换导致可逆的ICR反转。基于此原理我们在多肽序列中引入了特定的酶切位点,当多肽被切割时,纳米通道表面电荷发生改变使得ICR方向发生变化。以MMP‑2为例,表现出良好的检测性能,检测限(LOD)为1pg·mL‑1,同时利用逻辑操作来实现抑制剂的筛选。

    一种基于共价有机框架胶囊的SARS-CoV-2 RNA裸眼检测方法

    公开(公告)号:CN115615941A

    公开(公告)日:2023-01-17

    申请号:CN202110797947.X

    申请日:2021-07-14

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明涉及了一种基于共价有机框架胶囊用于裸眼检测SARS‑CoV‑2 RNA的比色传感器的制备方法及应用本发明提出了一种新颖而简便的方法来制备共价有机骨架(COF)胶囊,该方法可用于建立一种新的裸眼检测新型冠状病毒核糖核酸的比色分析方法。我们采用可刻蚀的ZIF‑90作为牺牲模板来制备用于辣根过氧化物酶(HRP)包封的中空COF胶囊。所制备的COF胶囊可以为酶提供合适的微环境,提高酶的构象自由度,增强传质能力,并赋予酶高的环境抗性。通过这样的设计,所提出的检测方法对新型冠状病毒核糖核酸的检测表现出出色的分析性能。此外,该方法还可用于分析临床样本,并可成功地将新冠肺炎患者与健康人区分开来,表明其在临床诊断中具有良好的潜力。

    一种锆基金属有机框架比色阵列传感器的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN111443049B

    公开(公告)日:2022-01-11

    申请号:CN201910046219.8

    申请日:2019-01-17

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明涉及了一种锆基金属‑有机框架和单链DNA修饰金纳米颗粒的比色阵列传感器的制备方法及应用。通过设计了6种不同的单链DNA序列修饰在金纳米颗粒表面,形成独特的传感器识别元件。新型材料锆基金属有机框架通过不同的分子间作用力,可以结合并沉淀单链DNA序列修饰在金纳米颗粒,在某些蛋白质或精液样本的加入后,可以加速或减缓他们的结合力,影响其聚集行为,从而产生可检测的信号。因此,我们可以认为这些识别元件与不同的靶标结合具有不同的相互作用,我们可以通过组合分析每个识别元件的比色响应,可以明显的检测不同的靶标。本发明可以简单高效地用于多种蛋白质及男性精液的比色阵列分析,为男性不育症的分析提供检测依据。

    一种基于卤化铯铅钙钛矿纳米材料的潜指纹显现方法

    公开(公告)号:CN112754477B

    公开(公告)日:2021-12-24

    申请号:CN201911073703.6

    申请日:2019-11-05

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明提出一种基于卤化铯铅钙钛矿纳米晶体(CsPbX3NCs)的潜指纹显现方法,包括高质量CsPbX3NCs的制备、潜指纹样品的制备和潜指纹的显现等步骤。本发明采用CsPbX3NCs作显影剂,合成方便成本低、荧光量子产率高、光学性质易于调节、背景干扰小,并且整个指纹采集过程使用的设备易得而携带便捷,操作简便高效,可进行现场原位的潜指纹分析。

    一种基于通道表面切割胶原-DNA聚合物的基质金属蛋白酶检测方法

    公开(公告)号:CN112795619A

    公开(公告)日:2021-05-14

    申请号:CN201911115972.4

    申请日:2019-11-14

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于通道表面切割胶原‑DNA聚合物的基质金属蛋白酶检测方法,为高灵敏的疾病检测开辟了一个新的途径。首先,利用胶原‑DNA的相互作用,在多孔阳极氧化铝薄膜阻挡层表面修饰两条可以互补配对的DNA链(DNA S1和DNA S2),再进一步引入胶原(富含Gly‑Xaa‑Yaa序列的多肽)。DNA链与胶原底物通过自组装形成胶原‑DNA复合物。基质金属蛋白酶2(MMP‑2)通过识别胶原多肽链上的序列,并进一步切割胶原从而使阳极氧化铝薄膜表面空间位阻大大减小,因此改变通道中的离子电流,以实现对MMP‑2的高效、灵敏、快速、便捷检测的目的。此外通过改变PAA膜表面的修饰,还可以进一步模拟肿瘤细胞侵袭与转移的过程。此方法对于其他切割酶的检测也具有潜在的参考应用价值。

    一种基于卤化铯铅钙钛矿纳米材料的潜指纹显现方法

    公开(公告)号:CN112754477A

    公开(公告)日:2021-05-07

    申请号:CN201911073703.6

    申请日:2019-11-05

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明提出一种基于卤化铯铅钙钛矿纳米晶体(CsPbX3NCs)的潜指纹显现方法,包括高质量CsPbX3NCs的制备、潜指纹样品的制备和潜指纹的显现等步骤。本发明采用CsPbX3NCs作显影剂,合成方便成本低、荧光量子产率高、光学性质易于调节、背景干扰小,并且整个指纹采集过程使用的设备易得而携带便捷,操作简便高效,可进行现场原位的潜指纹分析。

    一种基于锆金属-有机框架的电化学传感器的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN112557473A

    公开(公告)日:2021-03-26

    申请号:CN201910914389.3

    申请日:2019-09-25

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明涉及了一种基于锆金属‑有机框架的电化学传感器的制备方法及其应用恶性胶质瘤是脑内最致命的肿瘤之一,由于致癌原因的复杂性以及血脑屏障的阻碍,早期诊断在技术上仍具有挑战性。恶性胶质瘤分泌的特异性外泌体可以穿过血脑屏障并在体液中循环,具有无创性早期诊断的潜力。因此,我们提出了一种基于锆金属有机骨架(Zr‑MOF)的新型无标记电化学生物传感器。在该方法中,设计的多肽链能够特异性地捕获恶性胶质瘤外泌体中高表达的人表皮生长因子受体(EGFR)和EGFR变异株(v)III突变株(EGFRvIII)。同时,以亚甲基蓝(MB)包裹的Zr‑MOF(MB@Zr‑MOF)作为化学选择标记,通过与外泌体磷脂双分子层膜外的磷酸基团相互作用,产生敏感的电化学信号。通过监测Z‑MOF内的电活性分子,可以定量检测外泌体的浓度,表现出广阔的临床诊断应用价值。

    特异性DNA假结结构修饰的金电极及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN105929001B

    公开(公告)日:2018-04-10

    申请号:CN201610243290.1

    申请日:2016-04-19

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明属于电化学传感器技术领域,具体涉及一种特异性DNA假结结构修饰的金电极及制备方法和应用。本发明所述特异性DNA假结结构修饰的金电极表面通过金‑巯键的作用自组装修饰有末端带亚甲蓝氧化还原标签、茎环1含Nanog结合序列的DNA假结结构,该生物传感器利用功能化的DNA假结结构探针修饰的金电极与目标蛋白反应后,引起DNA假结结构构象改变,借助具有良好导电性的电信号分子MB,实现了对转录因子Nanog的灵敏检测,可以有效区分靶蛋白与其他对照蛋白。本方法操作简单,具有较高灵敏性和特异性,最小检测范围是170pM。

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