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公开(公告)号:CN101130782B
公开(公告)日:2011-01-26
申请号:CN200710024146.X
申请日:2007-07-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 以葡萄糖为底物产1,3-丙二醇重组酿酒酵母的构建方法,属于基因工程技术领域。本发明先期构建了重组质粒pGAPZB-yqhD、pGAPZB-dhaB和载体pYX212-zeocin,并进一步构建了酿酒酵母的游离型表达载体pYX212-zeocin-pGAP-yqhD-pGAP-dhaB,将其在酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)W303-1A中进行表达。本发明的重组酿酒酵母能以葡萄糖为底物,发酵70h后,测得发酵液中的1,3-丙二醇含量约为1.5g/L。本发明在国内外首次成功实现基因yqhD和dhaB串联后在酿酒酵母中表达,为进一步构建以葡萄糖为底物高产1,3-丙二醇的基因工程菌打下基础。
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公开(公告)号:CN119985996A
公开(公告)日:2025-05-13
申请号:CN202510020106.6
申请日:2025-01-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种人乳铁蛋白间接竞争酶联免疫检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒包括:酶标板、抗人乳铁蛋白抗体、酶标二抗、封闭液、显色剂和终止液。本发明通过将Western‑Blot中的硝酸纤维素膜换成具有非特异性吸附蛋白的酶标板,随着样本,抗人乳铁蛋白抗体和酶标二抗的加入,形成乳铁蛋白‑一抗‑二抗复合物。加入显色剂进行显色反应,样本吸光度值与其所含乳铁蛋白的含量成正相关。通过吸光度值大小计算样品中人乳铁蛋白的含量。本发明提供的发酵液中人乳铁蛋白检测方法具有真实、经济、高效等优点。
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公开(公告)号:CN117802056B
公开(公告)日:2025-03-25
申请号:CN202311770042.9
申请日:2023-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成β‑紫罗兰酮的热带假丝酵母工程菌及应用,属于酶工程和代谢工程领域。本发明选取来源于植物矮牵牛的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因PhCCD1,通过易错PCR对PhCCD1进行随机突变,以热带假丝酵母β‑胡萝卜素生产菌株ANT‑06为底盘细胞,分别在其过氧化物酶体、细胞质中表达了PhCCD1酶突变体,筛选并获得三株能够高效合成β‑紫罗兰酮的热带假丝酵母工程菌株,产量达到173.6±7.0mg/L、136±3.9m/L、177.9±4.3mg/L,并从工程菌中克隆测序获得PhCCD1酶突变体。
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公开(公告)号:CN118995458A
公开(公告)日:2024-11-22
申请号:CN202411189749.5
申请日:2024-08-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成蛇麻烯的热带假丝酵母工程菌株及应用,属于代谢工程领域。本发明将蛇麻烯合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达,将从IPP和DMAPP到蛇麻烯合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达,将从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。应用本发明的方法构建的重组菌株的蛇麻烯产量显著提高,经过4天摇瓶发酵后蛇麻烯产量可达607.8mg·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成蛇麻烯,并且生产性能稳定,具有一定的应用前景。
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公开(公告)号:CN118240859A
公开(公告)日:2024-06-25
申请号:CN202410298243.1
申请日:2024-03-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产角鲨烯的热带假丝酵母工程菌及其构建方法,属于微生物技术领域。本发明以热带假丝酵母DC03为出发菌株,将来源于酿酒酵母的角鲨烯合成酶基因通过CRISPR‑Cas9技术整合至热带假丝酵母菌株DC03的基因组上。通过代谢工程改造,整合表达了异源角鲨烯合酶基因ScERG9,并在过表达基因ScERG9后,将其与法尼基焦磷酸合酶基因ERG20进行融合表达,并敲除DPP1基因、弱化BTS1基因、下调ERG1基因表达等组合策略后,经发酵体积优化,重组热带假丝酵母的角鲨烯产量达到了202.5mg/L。本发明的制备方法具有成本低、效率高、操作简易、前景广等特点。
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公开(公告)号:CN117802056A
公开(公告)日:2024-04-02
申请号:CN202311770042.9
申请日:2023-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成β‑紫罗兰酮的热带假丝酵母工程菌及应用,属于酶工程和代谢工程领域。本发明选取来源于植物矮牵牛的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因PhCCD1,通过易错PCR对PhCCD1进行随机突变,以热带假丝酵母β‑胡萝卜素生产菌株ANT‑06为底盘细胞,分别在其过氧化物酶体、细胞质中表达了PhCCD1酶突变体,筛选并获得三株能够高效合成β‑紫罗兰酮的热带假丝酵母工程菌株,产量达到173.6±7.0mg/L、136±3.9m/L、177.9±4.3mg/L,并从工程菌中克隆测序获得PhCCD1酶突变体。
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公开(公告)号:CN117487680A
公开(公告)日:2024-02-02
申请号:CN202311417949.7
申请日:2023-10-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成ω‑氨基脂肪酸的酵母工程菌株构建及应用,属于生物工程技术领域。本发明提供了一种重组热带假丝酵母,所述重组热带假丝酵母为,敲除了基因组上的肉毒碱乙酰基转移酶基因、脂肪醛脱氢酶基因CtALD1、CtALD2,同时,在基因组上分别整合NADPH‑P450还原酶基因CtNCP、细胞色素氧化酶基因CYP52A17、长链脂肪酸转运蛋白基因CtFAT1、脂肪醇氧化酶基因FAO1基因和/或ω‑转氨酶基因CvTA基因,得到菌株在摇瓶发酵中产量从最初的30mg/L提高到了3075mg/L,在5L发酵罐中最终产量达到了20.3g/L,提高产量的同时为ω‑氨基脂肪酸生产菌株的研究提供思路。
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公开(公告)号:CN117487675A
公开(公告)日:2024-02-02
申请号:CN202311745114.4
申请日:2023-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株稳定表达人乳铁蛋白的里氏木霉菌株及其应用,属于微生物及发酵工程技术领域。本发明通过在里氏木霉不同的宿主菌中表达人乳铁蛋白基因,筛选表达产物稳定的重组菌。进一步通过诱变育种获得生长速度快同时产物稳定的菌株,其中编号为CJ2095的菌株的生长速度正常而表达产物的稳定性明显高于其它菌株。该菌株命名为Trichoderma sp.CJ2095,中文名为里氏木霉CJ2095,该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 20231481。该菌株发酵获得的重组人乳铁蛋白在发酵液中能较长时间的保持稳定,在大规模发酵制备重组人乳铁蛋白时能减轻企业后提取工作压力、降低后提取成本,有效减少了后提取工段的设备投资。
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公开(公告)号:CN116694589A
公开(公告)日:2023-09-05
申请号:CN202310663759.7
申请日:2023-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变,经筛选获得复合突变体T189V/V207M,在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点,通过定点饱和突变,提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍,突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91%,具有工业化生产前景。
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公开(公告)号:CN114736918B
公开(公告)日:2023-08-25
申请号:CN202210356043.8
申请日:2022-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种整合表达生产红景天苷的重组大肠杆菌及其应用,属于生物技术领域。本发明采用E.coli YMGR5A作为宿主菌株,整合表达了来源于拟南芥的糖基转移酶基因UGT85A1,即在宿主菌株中,在不同位点整合表达的UGT85A1基因,获得多拷贝数的产红景天苷重组大肠杆菌菌株;E.coli 5A8S菌株在装有50mL M9Y培养基的250mL摇瓶发酵后,红景天苷的产量为2.42g/L。在装有2.5L M9Y培养基的5L发酵罐发酵后,红景天苷最高产量为9.34g/L,单位菌体浓度的产量为0.27g/(L·OD600),而且该整合表达菌株相比质粒表达菌株而言,具有良好的遗传稳定性和生长状况。
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