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公开(公告)号：CN116474085A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310490815.1
申请日：2023-05-04
Applicant: 扬州大学
IPC: A61K39/235 , C12N15/861 , C12N15/34 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，疫苗是灭活的表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F。表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F的构建方法，在表达EGFP的重组血清4禽腺病毒的F1和F2基因之间插入血清8b型禽腺病毒纤突基因。一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，灭活是将细胞培养的FA4‑F的重组病毒液加入0.1％v/v的甲醛37℃作用24h进行灭活；甲醛灭活病毒液与油佐剂按1:3(v/v)的比例乳化用于制备油佐剂灭活疫苗。通过本发明，针对目前国内鸡群中正流行爆发的由FAdV‑4和FAdV‑8感染引起的HHS和IBH，为防控FAdV‑4和FAdV‑8b的感染提供了候选疫苗株；因此，本发明具有一定的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN116376979A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310353553.4
申请日：2023-04-04
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术的敲除鸡柯萨奇腺病毒受体CAR基因的细胞系的构建方法，包括以下步骤：步骤1)、设计一种特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA；步骤2)、构建一种用于靶向敲除鸡CAR基因的CRISPR‑Cas9系统，CRISPR‑Cas9系统中含有Cas9蛋白和上述特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA，或者含有携带编码Cas9蛋白的编码序列和编码sgRNA的编码序列；CRISPR‑Cas9系统中，Cas9蛋白基因和sgRNA序列位于同一载体上，所述载体为lentiCRISPR v2；步骤3)、将lentiCRISPR v2质粒转染到细胞中，利用CRISPR‑Cas9系统编辑实现CAR基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源CAR敲除的细胞系。本发明为探究CAR生物学功能与解析CAR基因在FAdV‑8b的感染中的作用打下了基础，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN111534547A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010426111.4
申请日：2020-05-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/70
Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV-4-F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV-4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV-4-F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5-7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111518777A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010426012.6
申请日：2020-05-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/34 , C12N15/866 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。
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公开(公告)号：CN108872570A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201811100860.7
申请日：2018-09-20
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/543 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株、抗体及试剂盒，属于生物技术检测技术领域。本发明提供的基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑3B5和杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑6H9。本发明所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能够实现FAdV‑4病毒的双抗夹心高效检测，特异性强且灵敏度高，适用于临床样本中微量抗原的检测。
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公开(公告)号：CN107607717A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710669646.2
申请日：2017-08-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/535 , C07K14/075 , C12N15/70
Abstract: 本发明公开了一种基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F2表达产物的ELISA酶标板，阳性阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品稀释液、显色液以及洗涤液。本发明建立的FAdV-4抗体的间接ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV-4抗体，而与抗流感病毒血清(AIV)、抗马立克病毒血清(MDV)、抗新城疫病毒血清(NDV)、抗禽网状内皮组织增生症病毒血清(REV)以及SPF鸡血清不反应(图6)。因此，该试剂盒具有良好FAdV-4的特异性，能用于FAdV-4感染及免疫状况流行病学调查。
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公开(公告)号：CN106018780A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610327488.8
申请日：2016-05-17
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: G01N33/5302 , G01N21/6486
Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F1蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F1蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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公开(公告)号：CN105973854A
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201610327763.6
申请日：2016-05-17
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: G01N21/6486 , G01N33/5302
Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液和洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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