公开(公告)号：CN113929753A

公开(公告)日：2022-01-14

申请号：CN202111207794.5

申请日：2021-10-18

Applicant: 扬州大学 ,  国药集团扬州威克生物工程有限公司

Inventor： 叶建强 ,  隆玉兰 ,  谢松桦 ,  张建军 ,  张伟 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  王伟康

IPC: C07K14/075 ,  C12N15/866 ,  C12N5/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种真核重组蛋白在试剂盒中的应用、试剂盒及其应用。将真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，所述真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白由Sf9昆虫表达系统表达获得。本发明将由Sf9昆虫表达系统表达获得的真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，具有良好的FAdV‑4特异性、敏感性，能够特异地、有效地检测出感染FAdV‑4或免疫FAdV‑4疫苗的鸡群中抗FAdV‑4抗体，在FAdV‑4病毒流行病学调查中具有良好的应用价值，可用于FAdV‑4感染及免疫状况流行病学调查。

公开(公告)号：CN111534547A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010426111.4

申请日：2020-05-19

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  隆玉兰 ,  秦爱建 ,  张伟 ,  王伟康 ,  谢泉 ,  张建军 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞

IPC: C12N15/866 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV-4-F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV-4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV-4-F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5-7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。

公开(公告)号：CN111518777A

公开(公告)日：2020-08-11

申请号：CN202010426012.6

申请日：2020-05-19

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  王伟康 ,  秦爱建 ,  张伟 ,  隆玉兰 ,  谢泉 ,  张建军 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/866 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。