一种猪德尔塔冠状病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的间接ELISA试剂盒

    公开(公告)号:CN109880843A

    公开(公告)日:2019-06-14

    申请号:CN201910237177.6

    申请日:2019-03-27

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明属于生物技术检测领域,具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒PDCoV抗原制备方法及利用该抗原制备的间接ELISA试剂盒。该抗原的制备方法是:选取猪德尔塔冠状病毒N基因796~1026nt核苷酸区域,按照大肠杆菌密码子使用偏嗜性对该核苷酸区域进行优化设计,优化的基因片段如Seq No.2,优化片段克隆入pET-32a(+)载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效可溶性表达,进而通过Ni-NTA亲和层析方法进行纯化而获得。本发明确保了重组蛋白在大肠杆菌表达系统中表达效率更高,更有利于形成可溶性表达产物。制备的间接ELISA试剂盒更适用于PDCoV感染流行病学调查中对猪群进行群体性高通量筛查。

    一种鉴别滑液囊支原体野毒株与疫苗株MS-H的实时荧光定量PCR试剂盒

    公开(公告)号:CN110699469A

    公开(公告)日:2020-01-17

    申请号:CN201911071771.9

    申请日:2019-11-05

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种区分滑液囊支原体野毒株和疫苗株MS-H的实时荧光定量PCR试剂盒,试剂盒含有:序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示的PCR引物,序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的探针,所述探针的5’端分别标记有FAM和VIC报告基团,3’端均标记有MGB荧光淬灭基团。经过体外实验证明本发明的试剂盒敏感性高、特异型强、重复性好,能准确区分MS温度敏感型疫苗株(MS-H株)和MS野毒株,既可用于对已经经过分离培养并纯化的MS分离株进行鉴别,也可用于免疫鸡群MS-H疫苗株在鸡体内的复制效率评估与野毒感染的监测。

    猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒

    公开(公告)号:CN110361542A

    公开(公告)日:2019-10-22

    申请号:CN201910674711.X

    申请日:2019-07-25

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明属于生物技术检测领域,具体涉及一种针对猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。该试剂盒包被有单克隆抗体PDCoV-N-1A2的酶标板、阳性和阴性对照、HRP标记的检测抗体PDCoV-N-5C5、样品稀释液、显色液以及洗涤液。其中所述抗体PDCoV-N-1A2和PDCoV-N-5C5分别由杂交瘤细胞株PDCoV-N-1A2和PDCoV-N-1A2分泌。本发明的试剂盒以1A2为捕获抗体、以杂交5C5(HRP偶联)为检测抗体建立的双抗体夹心ELSIA方法可特异性的检测PDCoV N蛋白,为PDCoV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。

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