公开(公告)号：CN109913423A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910237539.1

申请日：2019-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张小荣 ,  钱炳旭 ,  吴艳涛 ,  陈杨 ,  郭梦娇 ,  张成成 ,  曹永忠

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/50 ,  C12Q1/70

Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的重组细胞系及其应用。所述细胞系含有猪德尔塔冠状病毒N蛋白基因和抗性筛选基因。本发明获得的稳定表达PDCoV-N蛋白的带有嘌呤霉素抗性的重组细胞系，可用于检测PDCoV特异性抗体，对于未经疫苗免疫的猪群，监测到特异性抗体阳性反应即可确定该猪群已经发生野毒感染。

公开(公告)号：CN109880843A

公开(公告)日：2019-06-14

申请号：CN201910237177.6

申请日：2019-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张小荣 ,  钱炳旭 ,  吴艳涛 ,  郭梦娇 ,  张成成 ,  曹永忠 ,  陈杨

IPC: C12N15/70 ,  C07K14/165 ,  C07K1/22 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒PDCoV抗原制备方法及利用该抗原制备的间接ELISA试剂盒。该抗原的制备方法是：选取猪德尔塔冠状病毒N基因796～1026nt核苷酸区域，按照大肠杆菌密码子使用偏嗜性对该核苷酸区域进行优化设计，优化的基因片段如Seq No.2，优化片段克隆入pET-32a(+)载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效可溶性表达，进而通过Ni-NTA亲和层析方法进行纯化而获得。本发明确保了重组蛋白在大肠杆菌表达系统中表达效率更高，更有利于形成可溶性表达产物。制备的间接ELISA试剂盒更适用于PDCoV感染流行病学调查中对猪群进行群体性高通量筛查。

公开(公告)号：CN109810950A

公开(公告)日：2019-05-28

申请号：CN201910197593.8

申请日：2019-03-15

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张小荣 ,  吴艳涛 ,  赵峰 ,  陈杨 ,  张成成 ,  郭梦娇 ,  曹永忠

IPC: C12N7/00 ,  C12N15/40 ,  C12Q1/70 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物医药领域，具体涉及一株G2b亚型猪流行性腹泻病毒致弱毒株的制备及其应用。所述G2b亚型猪流行性腹泻病毒致弱毒株是JSX2014/ATT，它的保藏号是CCTCC NO.V201865；它的基因组序列如SEQ ID NO.37所示。本发明还公开了该弱毒株JSX2014/ATT在制备G2b亚型猪流行性腹泻病毒变异毒株弱毒疫苗中的应用。本发明通过Vero细胞连续传代和空斑纯化，筛选出致弱的G2b亚型PEDV弱毒株JSX2014/ATT株，在Vero细胞上复制性能稳定，效价高，可用于进一步研制G2b亚型PEDV变异毒株弱毒苗。

公开(公告)号：CN110361542A

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201910674711.X

申请日：2019-07-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张小荣 ,  钱炳旭 ,  吴艳涛 ,  郭梦娇 ,  张成成 ,  曹永忠 ,  陈杨

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/577 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种针对猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。该试剂盒包被有单克隆抗体PDCoV-N-1A2的酶标板、阳性和阴性对照、HRP标记的检测抗体PDCoV-N-5C5、样品稀释液、显色液以及洗涤液。其中所述抗体PDCoV-N-1A2和PDCoV-N-5C5分别由杂交瘤细胞株PDCoV-N-1A2和PDCoV-N-1A2分泌。本发明的试剂盒以1A2为捕获抗体、以杂交5C5(HRP偶联)为检测抗体建立的双抗体夹心ELSIA方法可特异性的检测PDCoV N蛋白，为PDCoV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。