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公开(公告)号：CN113265450A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110651659.3
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6858 , C12Q1/66
Abstract: 本发明涉及一种研究组蛋白H3K4me2酶/转录因子复合体调控靶基因转录的方法，查找目的样本中MLL2/ASH2L/DPY30/WDR5/RBBP5共同富集的基因，筛选出与目的样本相关的候选基因X用作后续实验；构建X基因启动子截短片段的双荧光素酶报告载体，转染293T细胞后，培养48h，收集样本进行双荧光素酶报告检测，确定核心启动区域；对核心启动区域进行生物信息学分析，利用jaspar在线网站，对核心区域可能存在的转录因子进行分析，获得与组蛋白甲基化酶结合区域相同的转录因子，作为候选复合蛋白；分别构建5个组蛋白甲基化酶的标签载体和转录因子的标签载体，利用pulldown实验，检测组蛋白甲基化酶与转录因子的结合；通过本发明，实验设计严谨，应用广泛，在不同生物学过程均适用。
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公开(公告)号：CN111965094A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010853561.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC-like细胞，将获得的PGC-like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC-like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC-like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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公开(公告)号：CN111925981A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010868114.3
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/6879 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供了一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法，旨在鸡胚孵化至4.5天时,取下生殖嵴，通过血液进行性别鉴定后分离出雌雄鸡胚的PGCs，将为早期干细胞的进一步应用奠定基础。本方法适用于家禽雌雄原始生殖细胞的分离，方法新颖科学，结果准确可靠。本发明可以准确的分离鸡雌雄原始生殖细胞，为PGCs在医学以及发育生物学、禽类嵌合体制备、转基因禽类的方面研究提供准确的原材料。此外，本发明中的细胞分离方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN111849873A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748573.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/02 , C12Q1/6888 , G01N33/68
Abstract: 一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN110484493A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910810444.4
申请日：2019-08-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞CEFs成iPSCs的体系建立方法，其特征是，设置不同浓度的小分子化合物组合体系，细胞形态学观察、毒性试验及qRT-PCR检测相关基因的表达，验证小分子化合物在鸡CEFs诱导重编程中是否适用及其适宜诱导浓度；然后利用剔除法结合qRT-PCR、间接免疫荧光、细胞流式分析技术、AKP染色、EDU细胞增值技术手段优化诱导体系，建立适宜鸡CEFs重编程诱导体系。本发明解决了器官来源及免疫排斥问题，同时为个体发育及遗传修饰与保存的研究提供了新方法；为后续诱导多能干细胞的使用奠定理论和技术基础，也为其他物种的化学诱导重编程研究提供参考。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118892113A
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202410933465.6
申请日：2024-07-12
Applicant: 扬州大学
IPC: A01N1/02 , C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了鸡胚胎期性腺的冷冻保护液、冻存及原始生殖细胞分离培养方法，涉及畜牧学和生物技术领域。冷冻保护液包括A液和B液；其中，A液包括：胎牛血清、CO2独立培养基和GlutaMAX，且胎牛血清、CO2独立培养基和GlutaMAX的体积比为80～90:10～20:1；B液包括：A液和二甲基亚砜，且A液和二甲基亚砜的体积比为4～6:1。冻存及原始生殖细胞分离培养方法包括：鸡胚性腺的获取；鸡胚性腺的冻存；鸡胚性腺的复苏；原始生殖细胞的分离培养。本发明可以将鸡胚胎期性腺冻存后，在合适的时间和地点再进行复苏，对性腺中的PGCs进行培养建系，且冻存、复苏和PGCs建系的效率高，获得的PGCs细胞系依然保持PGCs的生物学特性。
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公开(公告)号：CN116042715A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202310028001.6
申请日：2023-01-09
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供了一种鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平的调控方法，属于基因编辑技术领域。本发明的方法包括如下步骤：(1)设计并扩增得到靶向鸡TDRD1基因启动子区域的sgRNA；(2)将酶切后的dCas9‑LSD1载体与步骤(1)的sgRNA连接，得到具有靶向性的dCas9‑LSD1打靶载体；(3)将所述dCas9‑LSD1打靶载体转染入细胞中，来调控鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平。本发明构建的dCas9‑LSD1打靶载体可以作用于特定基因局部的启动子区位点，可以调控区域性的组蛋白甲基化水平，还可以明确在鸡SSC发育过程中组蛋白甲基化修饰区域。
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公开(公告)号：CN113278686A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110651752.4
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种研究DNA甲基化调控重编程过程的方法，包括以下步骤：步骤（1）、在山中因子Oct4、Sox2、Klf4及c‑Myc诱导的基础上添加DNA甲基化酶抑制剂5’aza，按照山中伸弥提供的诱导方法对体细胞进行诱导，在不同诱导天数观察细胞形态；步骤（2）、当观察到出现细胞克隆时收集细胞进行荧光定量检测、间接免疫荧光检测、碱性磷酸酶染色、染色体核型分析和edu增殖检测；步骤（3）、确定5’aza的效果后，将四因子和5’aza分别进行组合处理体细胞进行诱导，检测ips克隆的形成，确定最有效的组合形式。通过本发明，通过山中因子和DNA甲基化抑制剂5’aza的不同组合诱导，探明DNA甲基化在体细胞重编程诱导中的作用。
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公开(公告)号：CN111826430A
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN202010724836.1
申请日：2020-07-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6876 , G16B25/10 , G16B30/00
Abstract: 一种研究鸡PGCs中lncRNA和组蛋白甲基化酶共调控靶基因的方法，属于生物技术领域。通过生物信息学分析将RNA-seq和CHIP-seq联合筛选出受lncRNA和组蛋白甲基化酶共同调控的靶基因，为研究PGCs形成的表观遗传和遗传机制网络提供参考。
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公开(公告)号：CN111763722A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010731512.0
申请日：2020-07-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/6888 , C12N15/89
Abstract: 一种基因组测序鉴定PGCs介导后代生成的方法，属于生物技术领域。本发明的通过基因组测序鉴定PGCs介导后代生成的研究方法切实可靠，严谨准确，成效显著，为CEF转分化形成的PGC-like细胞介导产生的后代鸡的鉴定工作提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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