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公开(公告)号：CN112430612A
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN202011443150.1
申请日：2020-12-08
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种SpRY基因及其应用。本发明在OsSpCas9的基础上突变11个氨基酸获得SpRY基因。并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用突变的SpRY基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切。本发明实现了水稻基因打靶，这是因为经突变后的SpRY适用于水稻的基因组剪切。
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公开(公告)号：CN113201557B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202110506582.0
申请日：2021-05-10
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种引导编辑系统介导作物产生内源除草剂抗性的方法，本发明获得了多种除草剂抗性的ACCase突变基因型，所述ACCase突变型基因在不同位点分别获得单一的氨基酸突变。首先利用CRISPR介导的引导编辑系统，获得ACCase突变型基因，具体表现为第1879位氨基酸由异亮氨酸分别突变为亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸等，第1927位由脯氨酸突变为酪氨酸或苯丙氨酸，第2097位由色氨酸突变为甘氨酸、丝氨酸或亮氨酸，第2139位由异亮氨酸突变为天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸，第2176位由天冬氨酸突变为甘氨酸，第2194位由甘氨酸突变为丝氨酸和丙氨酸。这些ACCase突变型基因使受体植物在不同程度上具有对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂的抗(耐)性。
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公开(公告)号：CN112538492B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202011474234.1
申请日：2020-12-14
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种识别PAM序列为NRTH的SpCas9n变体及相应碱基编辑系统。本发明的SpCas9n变体融合ABE的碱基编辑系统入生物体或生物细胞内，使所述SpCas9n变体、sgRNA和ABE的编码基因均得到表达，实现基因组靶点序列的编辑；所述sgRNA靶向所述靶点序列；所述靶点序列的PAM序列为NRTH，N为A、T、C或G；R为A或T；H为A，T或C。本发明利用SpCas9n变体融合ABE的碱基编辑系统在水稻中实现了更多的靶点序列中由A:T到G:C的替换，如PAM序列为NRTH的靶点序列，扩展了ABE介导的碱基替换系统的编辑范围，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN112626049B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN202011481713.6
申请日：2020-12-14
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRRH基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRRH突变体，发现利用该SpCas9‑NRRH突变体进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRRH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
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公开(公告)号：CN112575014B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN202011462235.4
申请日：2020-12-11
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所 , 合肥丰乐种业股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种碱基编辑器SpCas9‑LjCDAL1及其构建和应用。本发明设计合成了新的类胞嘧啶脱氨酶LjCDAL1基因，融合失活的nSpCas9基因及3个重复的尿嘧啶糖基化酶基因抑制剂基因(uracil DNA glycosylase(UDG)inhibitor，eUGI)，成为SpCas9‑LjCDAL1基因。并且本发明还提供包含该SpCas9‑LjCDAL1基因的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的SpCas9‑LjCDAL1基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换，特别是实现由C/G碱基突变成T/A。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112725348A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN201911029085.5
申请日：2019-10-28
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT，还提供包含该ABEHPT的一种表达载体，以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后，能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因，通过潮霉素筛选，提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量，从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明，利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升，在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN112575014A
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN202011462235.4
申请日：2020-12-11
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所 , 合肥丰乐种业股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种新型的碱基编辑器SpCas9‑LjCDAL1及其构建和应用。本发明设计合成了新的类胞嘧啶脱氨酶LjCDAL1基因，融合失活的nSpCas9基因及3个重复的尿嘧啶糖基化酶基因抑制剂基因(uracil DNA glycosylase(UDG)inhibitor，eUGI)，成为SpCas9‑LjCDAL1基因。并且本发明还提供包含该SpCas9‑LjCDAL1基因的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的SpCas9‑LjCDAL1基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换，特别是实现由C/G碱基突变成T/A。
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公开(公告)号：CN111763672A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010618772.7
申请日：2020-06-30
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/46
Abstract: 本发明提供一种植物低温诱导表达启动子Poscold10及其应用。本发明还提供了含有该启动子的表达盒、植物表达载体、宿主菌和转化子。具体而言，本发明将上述启动子应用在植物基因工程中。本发明提供的启动子能够特异地驱动外源基因在低温条件下在植物中高强度表达。通过将本发明的启动子连接到待表达的基因并利用载体转入到植物植株中，能够在低温条件下驱动外源基因在植物的各个部位中表达。
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公开(公告)号：CN113151314B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN202110506569.5
申请日：2021-05-10
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种植物抗除草剂ACCase突变型基因，所述植物ACCase基因为野生型ACCase基因发生以下两种突变：第5779、第5780位点核苷酸发生突变，分别由C变成T、C变成A，或者第5779、第5780、第5781位点核苷酸发生突变，分别由C变成T、C变成A、T变成C。本申请的发明人发现了几种突变型基因，其对应的植株该突变体植株具有对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂的抗(耐)性，并且，本申请的发明人将其应用到水稻中，证实了其具有非常良好的除草剂的抗(耐)性。
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公开(公告)号：CN115029374A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210729325.8
申请日：2022-06-24
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的pegRNA表达框及相应骨干载体和应用。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中，pegRNA表达框和融合蛋白表达框位于同一双元载体中，pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成。本发明的enpPE2引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率，并能获得纯合突变植株，具有很好的应用前景。
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