一种提高水稻单碱基编辑效率的基因、方法及应用

    公开(公告)号:CN112725348A

    公开(公告)日:2021-04-30

    申请号:CN201911029085.5

    申请日:2019-10-28

    Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT,还提供包含该ABEHPT的一种表达载体,以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后,能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因,通过潮霉素筛选,提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量,从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明,利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体,进而构建水稻打靶载体,导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升,在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。

    一种提高水稻单碱基编辑效率的基因、方法及应用

    公开(公告)号:CN112725348B

    公开(公告)日:2022-04-01

    申请号:CN201911029085.5

    申请日:2019-10-28

    Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT,还提供包含该ABEHPT的一种表达载体,以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后,能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因,通过潮霉素筛选,提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量,从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明,利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体,进而构建水稻打靶载体,导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升,在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。

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