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公开(公告)号：CN112522229B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202011158149.4
申请日：2020-10-26
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种转氨酶突变体及其制备西他列汀中间体的应用，所述突变体是SEQ ID NO：2所示氨基酸序列第74位的酪氨酸取代为脯氨酸、第228位的谷氨酸取代为天冬氨酸、第254位的亮氨酸取代为丙氨酸、第290位的蛋氨酸取代为苏氨酸获得的。本发明以含有转氨酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或纯酶作为生物催化剂，以西他列汀中间体前体酮或潜手性羰基化合物为底物，制备西他列汀中间体或西他列汀酯类中间体；本发明方法的总收率约82％，产物e.e.值达到99％。
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公开(公告)号：CN110540975B
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN201910800438.0
申请日：2019-08-28
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用，该ω‑转氨酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第56位或第134位进行单突变获得；第56位的苯丙氨酸替换成缬氨酸、组氨酸或酪氨酸；第134位的苏氨酸替换成甘氨酸。本发明通过分子对接和同源建模等方式获得一些可能影响其催化活性的位点，对其进行了定点突变，最终得到的ω‑转氨酶突变体不仅具有较高的酶活，酶活均高于300U/g，至少是野生型的2.7倍，而且能够高效催化西他列汀中间体前体酮1‑哌啶‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑二丁酮合成西他列汀中间体(R)‑3‑氨基‑1‑哌啶‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1‑丁酮，转化率高达85％。
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公开(公告)号：CN112522229A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011158149.4
申请日：2020-10-26
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种转氨酶突变体及其制备西他列汀中间体的应用，所述突变体是SEQ ID NO：2所示氨基酸序列第74位的酪氨酸取代为脯氨酸、第228位的谷氨酸取代为天冬氨酸、第254位的亮氨酸取代为丙氨酸、第290位的蛋氨酸取代为苏氨酸获得的。本发明以含有转氨酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或纯酶作为生物催化剂，以西他列汀中间体前体酮或潜手性羰基化合物为底物，制备西他列汀中间体或西他列汀酯类中间体；本发明方法的总收率约82％，产物e.e.值达到99％。
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公开(公告)号：CN111534494B
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202010273326.7
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第77位的精氨酸、第181位的亮氨酸、第130位的精氨酸、第139位的酪氨酸和第273位苏氨酸经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)‑ω‑TA重组酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)‑ω‑TA突变体催化剂，该突变体能够以前体酮类似物1‑(吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑丁二酮为底物不对称催化合成西他列汀中间体(R)‑3‑氨基‑1‑(吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁‑1‑酮，且转化率较高，最高可达到94.6％。
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公开(公告)号：CN111411094B
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202010273576.0
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体及其应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸、第79位精氨酸、第51位的谷氨酰胺、第149位的缬氨酸、第235位亮氨酸和第216位甘氨酸，经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)‑ω‑TA酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)‑ω‑TA突变体催化剂，该突变体能够生物催化前体酮类似物1‑(3‑氧吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑丁二酮合成西他列汀中间体(R)‑1‑[3‑氨基‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁酰基]吡咯‑3‑酮，且转化率较高，最高可达到95.4％，对于突破西他列汀生物催化制备技术具有里程碑意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108866021B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201810539604.1
申请日：2018-05-30
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种氨基转移酶突变体及其制备西他列汀中间体的应用，所述的应用以含有氨基转移酶编码基因的重组大肠杆菌经发酵培养获得的湿菌体作为生物催化剂，以西他列汀中间体前体酮为底物，以二甲基亚砜为助溶剂、以磷酸吡哆醛为辅酶、以异丙胺为辅底物，以pH 8‑9三乙醇胺缓冲液为反应介质构成反应体系，在温度30‑45℃、搅拌速度100‑250r/min的条件下进行生物催化反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得西他列汀；本发明方法的总收率约81％，产物e.e.值达到99％。
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公开(公告)号：CN111518783A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010277476.5
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶、突变体及其在制备西他列汀中的应用，该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第214位和第146位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(785.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮底物制备西他列汀，转化率最高可达97.1％。
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公开(公告)号：CN107384887A
公开(公告)日：2017-11-24
申请号：CN201710543569.6
申请日：2017-07-05
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种氨基转移酶、突变体及其制备西他列汀的应用，所述的应用以含有氨基转移酶编码基因的重组大肠杆菌经发酵培养获得的湿菌体作为生物催化剂，以西他列汀前体酮为底物，以二甲基亚砜为助溶剂、以磷酸吡哆醛为辅酶、以异丙胺为辅底物，以pH 8-9三乙醇胺缓冲液为反应介质构成反应体系，在温度30-45℃、搅拌速度100-250r/min的条件下进行生物催化反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得西他列汀；本发明以氨基转移酶及其突变体为生物催化剂，直接以潜手性羰基化合物西他列汀前体酮为底物，同时异丙胺为辅底物，磷酸吡多醛为辅酶，进行生物催化反应、分离纯化制备高光学纯度的西他列汀，该方法的总收率76％，产物e.e.值达到99％。
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公开(公告)号：CN118956796A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411029085.6
申请日：2024-07-30
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种羰基还原酶突变体M6，由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经下列组合突变所得：(1)第138位丙氨酸突变为缬氨酸；(2)第190位丙氨酸突变为甲硫氨酸；(3)第193位丝氨酸突变为丙氨酸；(4)第201位酪氨酸突变为色氨酸；(5)第204位天冬酰胺突变为组氨酸；(6)第205位缬氨酸突变为谷氨酸。本发明的突变体的相对活性与野生型相比提高了19倍，易于发酵制备，湿菌体单位酶活高，可直接用于氟苯尼考关键中间体2a的酶法催化制备，在300g/L底物浓度下反应8小时即可实现完全转化，且产物立体选择性高，相较于化学法来说该反应绿色安全，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN109761755B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN201910205265.8
申请日：2019-03-18
Applicant: 浙江华康药业股份有限公司 , 浙江大学 , 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种集成蒸发、结晶和离心分离制备木糖醇的装置，包括木糖醇罐、清洗液罐、循环回收罐和多元分流系统，多元分流系统包括J组用于蒸发浓缩的蒸发器、K组用于真空结晶的真空结晶釜和L组用于离心分离的离心机，其中2≤J≤6、6≤K≤12、2≤L≤4，各组内的蒸发器、真空结晶釜和离心机之间分别通过管道和阀门依次相互串联连接；通过控制各阀门的通断实现木糖醇交换液在多元分流系统内进行串联模式和并联模式的切换和控制，使得蒸发、结晶和分离过程的效果达到最佳调配，产率提高。本发明还公开了该装置的控制方法。本发明过程和装备高度集成，实现制备木糖醇的一体化连续生产，能耗低且自动化程度高，原料得到充分利用。
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