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公开(公告)号：CN116083332A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202211677178.0
申请日：2022-12-26
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以Escherichia coli FMME N‑2为出发菌株，利用代谢工程手段表达调控中心碳代谢以平衡己二酸合成前体乙酰辅酶A和琥珀酰辅酶A的靶点基因，在此基础上，通过RBS序列调控己二酸生产的靶点基因片段的表达强度，最后经发酵放大验证己二酸产量，在36h达40.3g/L，达到目前水平的最高生产强度1.12g/L/h，有利于用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN115976002A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202211302524.7
申请日：2022-10-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化效率提高的丙酮酸脱羧酶突变体及其应用，本发明构建了一种来源于热带假丝酵母的丙酮酸脱羧酶突变体，用于催化生产4‑羟基苯乙醛。本发明突变体的催化半衰期(5.7h)和TTN(24600)较对照分别提高了2.85倍和2.07倍，且突变体表现出较高的脱羧活性。本发明得到的突变体在以4‑羟基苯丙酮酸为底物时，在25℃、pH 6.5的条件下反应12h，4‑羟基苯乙醛的产量可达5.08g/L，底物摩尔转化率达到67.28％。采用本发明的方法，提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率，加快了酶转化法生产4‑羟基苯乙醛的工业化进程。
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公开(公告)号：CN115851645A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211708911.0
申请日：2022-12-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种普通变形杆菌内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明构建了PvDAPDH突变体，与野生酶相比，能催化多种芳香族α‑酮酸合成D‑氨基酸，立体选择性可达95％，本发明构建的pvDAPDH三突变体W121I/H227I/R181S表现出对不同大体积芳香族α‑酮酸底物较好的兼容性，能同时催化大多数芳香族α‑酮酸底物转化成D‑氨基酸，对2‑氧代‑4‑苯基丁酸表现出较高催化活性，产物D‑高苯丙氨酸产量达到2.1g/L。本发明有效扩展了生物法合成芳香族D‑氨基酸工具箱。
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公开(公告)号：CN115838680A
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202211303473.X
申请日：2022-10-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种D‑对羟基苯甘氨酸高产菌株及其应用，本发明通过将D‑海因酶和D‑氨甲酰水解酶的突变体连接在双表达质粒pETduet‑1上，提高了D‑氨甲酰水解酶的表达，该菌株转化12h生产30g/L D‑对羟基苯甘氨酸的产量达到24.9g/L，摩尔转化率达到95.4％，转化12h生产40g/L D‑对羟基苯甘氨酸的产量达到30.4g/L，摩尔转化率达到87.4％；转化12h生产50g/L D‑对羟基苯甘氨酸的产量达到29.8g/L，转化24h产量达到33.0g/L，摩尔转化率75.9％。本发明方法在工业上用于提高D‑对羟基苯甘氨酸的产量具有极大的潜力和广泛的价值。
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公开(公告)号：CN112921012B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202110291856.9
申请日：2021-03-18
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了谷氨酸棒杆菌meso‑2,6‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过结合定点饱和突变、组合突变以及迭代饱和突变对CgDAPDH的蛋白质进行改造，克服了亲本酶因为氢原子转移距离较长而导致的催化活性低的局限，获得的突变体CgDAPDHBC621/D120S/W144S/I169P比酶活和kcat/Km值分别为亲本酶的38和120倍。将CgDAPDHBC621/D120S/W144S/I169P与PmL‑AAD、SambHmaS和PaMDH偶联后，以L‑酪氨酸为底物，D‑HPG产量达到6.33g/L，为D‑HPG的工业化生产提供了潜在的生产方法。
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公开(公告)号：CN108841844B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN201810670959.4
申请日：2018-06-26
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种高产苯丙酮酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过构象动力学工程方法改造奇异变形杆菌来源的氨基酸脱氨酶，改造后的氨基酸脱氨酶基因连接于pET 20b载体，在E.coli BL21(DE3)中表达。发酵罐培养重组菌株，收集湿菌体转化丙氨酸生产苯丙酮酸，当湿菌体添加量30g/L，转化12h苯丙酮酸产量可以达到72.5g/L，苯丙氨酸的摩尔转化率达到96.7％。
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公开(公告)号：CN113637654A
公开(公告)日：2021-11-12
申请号：CN202111145733.0
申请日：2021-09-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种重组磷脂酶D突变体及其在合成磷脂酰丝氨酸中的应用，属于生物工程技术领域。本发明先通过构建重组磷脂酶，所述重组磷脂酶是在来源于穗产色链霉菌的磷脂酶的基础上，在PLD的C端去掉信号肽并通过连接肽加上标签MBP获得的，所述重组磷脂酶突变体，是将重组磷脂酶的第379位、第169位、第185位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。本发明的重组磷脂酶突变体表现出较高的转磷脂酰活性，磷脂酰胆碱的转化率可达85.8％，磷脂酰丝氨酸产率可达72.12％，磷脂酰丝氨酸的产量可以达到57.69g/L。采用本发明的方法，提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率，降低了反应的成本。
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公开(公告)号：CN112746061A
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN202110203953.8
申请日：2021-02-23
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的改造方法通过组合突变设计出最佳突变体，对PvDAPDH的蛋白质进行改造，克服了之前野生型的酶因为活性低而导致的转化率低的局限，最终得到最佳突变体L7(PvDAPDHW121A/H227I/R180S)，其酶活为野生型的85倍；将该突变体L7进一步与L‑氨基酸脱氨酶(PmLAAD)和葡萄糖脱氢酶(BmGDH)级联，以L‑苯丙氨酸为底物，D‑苯丙氨酸产量达到48.5g/L，因此大大降低了之前的高菌体量以及昂贵的底物成本，为D‑苯丙氨酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112626100A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011588760.0
申请日：2020-12-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法，属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸，并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。
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公开(公告)号：CN109022338B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201811075039.4
申请日：2018-09-14
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种酶转化苯丙氨酸生产苯丙酮酸的工艺，属于生物工程技术领域。本发明通过对奇异变形杆菌来源的氨基酸脱氨酶突变体进行密码子优化和发酵条件优化，氨基酸脱氨酶酶活显著提高。进一步对转化条件进行优化，显著提高苯丙酮酸的产量，当湿菌体添加量25～30g/L，苯丙酮酸产量可以达到81.1～83.0g/L，苯丙氨酸的摩尔转化率达到98.0％以上。
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