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公开(公告)号：CN108841844B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN201810670959.4
申请日：2018-06-26
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种高产苯丙酮酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过构象动力学工程方法改造奇异变形杆菌来源的氨基酸脱氨酶，改造后的氨基酸脱氨酶基因连接于pET 20b载体，在E.coli BL21(DE3)中表达。发酵罐培养重组菌株，收集湿菌体转化丙氨酸生产苯丙酮酸，当湿菌体添加量30g/L，转化12h苯丙酮酸产量可以达到72.5g/L，苯丙氨酸的摩尔转化率达到96.7％。
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公开(公告)号：CN110964670B
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN201911370748.X
申请日：2019-12-26
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一株产L‑赖氨酸的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。所述大肠杆菌已于2019年6月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019435，保藏地址为中国武汉，武汉大学。本发明的大肠杆菌(Escherichia coli)FMME‑lys，表现出耐受高浓度L‑赖氨酸的能力，其耐受能力达260g/L，减少了在发酵过程中因产物对细胞产生毒害的影响，并进一步促进赖氨酸的生成。经发酵罐扩大培养，发酵33h L‑赖氨酸产量高达210g/L，葡萄糖得率为75％。
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公开(公告)号：CN109022338B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201811075039.4
申请日：2018-09-14
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种酶转化苯丙氨酸生产苯丙酮酸的工艺，属于生物工程技术领域。本发明通过对奇异变形杆菌来源的氨基酸脱氨酶突变体进行密码子优化和发酵条件优化，氨基酸脱氨酶酶活显著提高。进一步对转化条件进行优化，显著提高苯丙酮酸的产量，当湿菌体添加量25～30g/L，苯丙酮酸产量可以达到81.1～83.0g/L，苯丙氨酸的摩尔转化率达到98.0％以上。
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公开(公告)号：CN110643585A
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201911088054.7
申请日：2019-11-08
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种利用氨基酸脱氨酶生产α-酮-β-甲基正戊酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明是在氨基酸脱氨酶突变体Pm-LAAD*的基础上，利用构象动力学的方法进行蛋白质工程改造，获得新的突变体Pm-LAAD*(V411A/T414A)，其稳定性显著提高，50℃下半衰期从8h增加至10h，4℃冷藏保存的半衰期从150h上升至240h。该酶经过改造后，转化体系中不添加任何缓冲剂，转化通气量仅为0.2vvm，转化体系中添加湿细胞添加量15g/L，转化12h，L-异亮氨酸摩尔转化率达到95％以上，产量达到98.0g/L，下游纯化简易，极大地降低了生产成本，能够满足工业化需求。
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公开(公告)号：CN105018361B
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201510410296.9
申请日：2015-07-13
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种酿酒酵母高密度发酵培养的方法，属于发酵工程技术领域。以研究室从啤酒废酵母和白酒酒糟中筛选的酿酒酵母为生产菌株，在7L罐中进行高密度发酵培养，利用两阶段补料策略和发酵过程中通气量和搅拌的控制，最终酿酒酵母干重达到109.2g/L。本发明利用简单廉价的发酵培养基和补料培养基，通过科学合理控制发酵过程中各项参数，实现酿酒酵母的高密度发酵，为工业生产中酿酒酵母的高密度培养提供借鉴。
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公开(公告)号：CN108467860A
公开(公告)日：2018-08-31
申请号：CN201810264153.5
申请日：2018-03-28
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
CPC分类号： C12N9/88 , C12N15/70 , C12P13/005 , C12Y401/01015
摘要： 本发明公开了一种高产γ-氨基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过蛋白质工程改造巨大芽孢杆菌来源的谷氨酸脱羧酶，改造后的谷氨酸脱羧酶基因连接于pET24a载体，在E.coli BL21(DE3)中表达。在发酵罐中培养重组菌株，用于转化谷氨酸生产γ-氨基丁酸，湿细胞添加量7.0g/L，转化周期8h，产量可以达到425.0g/L，谷氨酸摩尔转化率达到99％，γ-氨基丁酸的时空产率为53.1g/L/h。
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公开(公告)号：CN109321541B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201811350819.5
申请日：2018-11-14
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种L‑氨基酸氧化酶的突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于谷氨酸棒杆菌的L‑氨基酸氧化酶进行定点突变，获得突变体Q183A，将突变体Q183A在大肠杆菌中进行异源表达，得到的重组菌对L‑缬氨酸的催化效率提高了18.7％，α‑酮异己酸的产量达到54.6g/L，底物摩尔转化率为84.6％。本发明提供的全细胞转化方法较化学法相比，具有反应条件温和，目标产物单一，易于分离，对环境友好等优势，且工艺简单，便于控制，易于推广应用。
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公开(公告)号：CN110734936A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201911128392.9
申请日：2019-11-18
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
IPC分类号： C12P7/42
摘要： 本发明公开了一种多酶级联生产(R/S)-羟基蛋氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(R)-HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至15h，(R)-HMTBA产量可达到97.0g/L，ee>99％，蛋氨酸摩尔转化率达到96.3％；利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(S)-HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至18h，(S)-HMTBA产量可达到98.0g/L，ee>99％，蛋氨酸摩尔转化率达到98.6％。
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公开(公告)号：CN109371070A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811350903.7
申请日：2018-11-14
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种高产α-酮异戊酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段将来源于谷氨酸棒杆菌编码L-氨基酸氧化酶的基因与表达载体相连。将构建好的表达质粒导入E.coli BL21(DE3)，通过卡那霉素抗性平板筛选获得重组的含L-氨基酸氧化酶工程菌。用于转化L缬氨酸生产α-酮异戊酸。通过控制温度和pH，金属离子、实现α-酮异戊酸的高效生产。在25℃、pH＝8.0、菌体量30g/L，底物浓度65g/L的条件下。α-酮异戊酸的产量最高可达51g/L，转化率为79.1％。
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公开(公告)号：CN109321541A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811350819.5
申请日：2018-11-14
申请人： 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
CPC分类号： C12N9/0022 , C12N15/1031 , C12N15/70 , C12P7/40 , C12Y104/03002 , C12Q2531/113
摘要： 本发明公开了一种L-氨基酸氧化酶的突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于谷氨酸棒杆菌的L-氨基酸氧化酶进行定点突变，获得突变体Q183A，将突变体Q183A在大肠杆菌中进行异源表达，得到的重组菌对L-缬氨酸的催化效率提高了18.7％，α-酮异己酸的产量达到54.6g/L，底物摩尔转化率为84.6％。本发明提供的全细胞转化方法较化学法相比，具有反应条件温和，目标产物单一，易于分离，对环境友好等优势，且工艺简单，便于控制，易于推广应用。
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