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公开(公告)号：CN107603957B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201710935163.2
申请日：2017-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法，本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒，利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间，实现提早检测到病原，提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时，ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF‑1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程，节约时间、成本，本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN108929881A
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201810886338.X
申请日：2018-08-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体及其构建方法和蛋白表达方法，属于病毒蛋白表达技术领域。本发明提供的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体，包括载体pGEX-6p-1和接入所述载体的gp37del基因，所述gp37del基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体能够实现gp37del蛋白的表达，并能够成功制备抗禽白血病病毒gp37蛋白多克隆抗体。
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公开(公告)号：CN119019516A
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202411439106.1
申请日：2024-10-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/50 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种用于鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒的抗原及其间接ELISA检测试剂盒和应用，所述抗原为经过纯化的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白的重组N蛋白，所述重组蛋白的编码基因如SEQ ID NO.1所示；所述间接ELISA检测试剂盒含有经过纯化的鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的酶标板。本发明建立的检测传染性支气管炎病毒抗体的ELISA试剂盒与进口的IDEXX试剂盒符合率为91.3％。本试剂盒具有成本低廉、使用简单方便、敏感性高且特异性强的优点，且与不同血清型的IBV均有良好的反应性，具有一定的市场应用前景与价值。
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公开(公告)号：CN118638783A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410709230.9
申请日：2024-06-03
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种敲除14‑3‑3ε基因的LMH细胞系及其构建方法和应用，包括如下步骤：设计特异性靶向鸡源14‑3‑3ε基因的sgRNA；构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源14‑3‑3ε基因的sgRNA的敲除质粒；将构建的敲除质粒对LMH细胞进行转染，筛选培养后获得14‑3‑3ε基因敲除的LMH细胞系。本发明通过CRISPR/Cas9基因编辑，成功获得鸡源14‑3‑3ε基因敲除LMH细胞系，发现该细胞系能够有效促进血清4型禽腺病毒的感染复制，该细胞系生长活性与正常LMH细胞无明显差异。本发明为探究鸡源14‑3‑3ε生物学功能以及解析14‑3‑3ε在FAdV‑4的感染复制中的作用打下了基础。
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公开(公告)号：CN116474085A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310490815.1
申请日：2023-05-04
Applicant: 扬州大学
IPC: A61K39/235 , C12N15/861 , C12N15/34 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，疫苗是灭活的表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F。表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F的构建方法，在表达EGFP的重组血清4禽腺病毒的F1和F2基因之间插入血清8b型禽腺病毒纤突基因。一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，灭活是将细胞培养的FA4‑F的重组病毒液加入0.1％v/v的甲醛37℃作用24h进行灭活；甲醛灭活病毒液与油佐剂按1:3(v/v)的比例乳化用于制备油佐剂灭活疫苗。通过本发明，针对目前国内鸡群中正流行爆发的由FAdV‑4和FAdV‑8感染引起的HHS和IBH，为防控FAdV‑4和FAdV‑8b的感染提供了候选疫苗株；因此，本发明具有一定的市场应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116286685A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310186696.0
申请日：2023-03-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/44 , C12N15/34 , C12N15/113 , C12N15/861 , C12N15/65 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达H9N2禽流感病毒XZ491毒株HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入H9N2禽流感病毒HA基因，成功获得H9N2禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和H9亚型禽流感病毒提供技术支撑和疫苗候选。与传统的重组禽腺病毒构建方法不同，本发明中靶向毒力基因fiber‑2，使用了双荧光体系，且整合了CRISPR/Cas9技术和Cre‑loxP重组系统，不需要对禽腺病毒全基因组进行克隆，使得重组禽腺病毒的构建、筛选及其纯化非常快捷及高效。
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公开(公告)号：CN115980344A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210805714.4
申请日：2022-07-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/58 , C07K14/08 , C12N15/866 , C12N15/40 , C07K1/22
Abstract: 本发明涉及一种基于昆虫细胞表达产物的检测新型鹅星状病毒抗体的ELISA试剂盒，本发明的原理是将表达新型GAstV的ORF2重组蛋白的杆状病毒感染Sf9细胞，并以镍柱亲和层析法纯化感染细胞裂解液上清中的ORF2重组蛋白，将纯化的重组蛋白分别作为包被抗原组装检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒。研究结果表明，建立的检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒具有良好的特异性和灵敏性，在新型GAstV病毒流行病学调查中具有良好的应用价值。
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公开(公告)号：CN114457115A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210220996.1
申请日：2022-03-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/40 , C12N7/01
Abstract: 本发明涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建GAstV‑ORF2基因重组杆状病毒表达载体：（2）表达重组GAstV‑ORF2蛋白的杆状病毒包装和传代：（3）将携带有GAstV‑ORF2基因的杆状病毒质粒转染进Sf9细胞，并在27℃无CO2培养箱中培养5‑7天，每天观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞上清，放入‑80℃保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒保存并扩大培养，得到表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒。本发明的原理是通过扩增鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2全长片段，构建杆状病毒重组载体，转染Sf9细胞，获得能够表达衣壳蛋白ORF2的杆状病毒。
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公开(公告)号：CN109295012B
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN201811212808.0
申请日：2018-10-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV‑J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV‑K‑env基因引物序列；PCR扩增ALV‑K囊膜蛋白基因片段和ALV‑J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF‑1细胞拯救出表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV‑J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV‑K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV‑K的中和抗体提供靶向病毒。
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公开(公告)号：CN111534547A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010426111.4
申请日：2020-05-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/70
Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV-4-F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV-4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV-4-F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5-7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。
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