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公开(公告)号：CN113912740A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111229660.3
申请日：2021-10-21
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种非洲猪瘟病毒I177L基因原核表达载体的方法，包括下述步骤：1）利用下述引物，以pGEX‑6p‑1质粒为模板，PCR扩增出pGEX‑6p‑1线性化表达载体；上游引物：5‘TAATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGC 3’；下游引物：5‘CATGGGCCCCTGGAACAGAACTTCCAGAT 3’；2）利用下述引物，以质粒pMD19T‑I177L为模板，PCR扩增出I177L原核表达片段；上游引物：5‘GTTCCAGGGGCCCATGTATGAAATTATTTTG3’；下游引物：5‘GTTTTCACCGTCATTAAAAGTAGATGAAC3’；3）利用重组酶ExnaseTM II对步骤1）和2）得到的PCR扩增产物进行快速重组克隆，得到阳性克隆；阳性克隆经IPTG诱导后进行表达鉴定与纯化，获得纯化的I177L融合蛋白。通过本发明，将获得非洲猪瘟I177L基因的表达载体，实现I177L基因在大肠杆菌中的表达，获得纯化的GST‑I177L融合蛋白。
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公开(公告)号：CN107603957A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710935163.2
申请日：2017-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法，本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒，利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间，实现提早检测到病原，提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时，ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF-1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程，节约时间、成本，本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN107603957B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201710935163.2
申请日：2017-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法，本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒，利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间，实现提早检测到病原，提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时，ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF‑1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程，节约时间、成本，本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108929881A
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201810886338.X
申请日：2018-08-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体及其构建方法和蛋白表达方法，属于病毒蛋白表达技术领域。本发明提供的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体，包括载体pGEX-6p-1和接入所述载体的gp37del基因，所述gp37del基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体能够实现gp37del蛋白的表达，并能够成功制备抗禽白血病病毒gp37蛋白多克隆抗体。
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公开(公告)号：CN109295012B
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN201811212808.0
申请日：2018-10-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV‑J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV‑K‑env基因引物序列；PCR扩增ALV‑K囊膜蛋白基因片段和ALV‑J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF‑1细胞拯救出表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV‑J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV‑K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV‑K的中和抗体提供靶向病毒。
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公开(公告)号：CN112630427A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011371468.3
申请日：2020-11-30
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , C12N15/50 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K14/165
Abstract: 本发明公开了一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，该试剂盒包括表达S1蛋白的LMH细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于QX型鸡传染性支气管病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群QX型鸡传染性支气管病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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公开(公告)号：CN110684736A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201910754620.7
申请日：2019-08-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90
Abstract: 本发明涉及到一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡Shp-2基因的细胞系及其构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡Shp-2基因的sgRNA，然后将sgRNA克隆至带有Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒并将质粒转染至细胞中，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选和亚克隆的方法最后获得阳性单克隆细胞株，从而获得鸡源Shp-2敲除的细胞系。本发明目的是构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的方法，及其靶向鸡Shp-2基因的sgRNA，以期获得鸡源Shp-2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN109295012A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811212808.0
申请日：2018-10-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV-J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV-K-env基因引物序列；PCR扩增ALV-K囊膜蛋白基因片段和ALV-J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF-1细胞拯救出表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV-J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV-K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV-K的中和抗体提供靶向病毒。
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