公开(公告)号：CN113912740A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111229660.3

申请日：2021-10-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陆月馨 ,  叶建强 ,  尹雪凤 ,  胡凤洁 ,  徐小龙 ,  谢菁

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/86 ,  C12N15/66 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种非洲猪瘟病毒I177L基因原核表达载体的方法，包括下述步骤：1）利用下述引物，以pGEX‑6p‑1质粒为模板，PCR扩增出pGEX‑6p‑1线性化表达载体；上游引物：5‘TAATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGC 3’；下游引物：5‘CATGGGCCCCTGGAACAGAACTTCCAGAT 3’；2）利用下述引物，以质粒pMD19T‑I177L为模板，PCR扩增出I177L原核表达片段；上游引物：5‘GTTCCAGGGGCCCATGTATGAAATTATTTTG3’；下游引物：5‘GTTTTCACCGTCATTAAAAGTAGATGAAC3’；3）利用重组酶ExnaseTM II对步骤1）和2）得到的PCR扩增产物进行快速重组克隆，得到阳性克隆；阳性克隆经IPTG诱导后进行表达鉴定与纯化，获得纯化的I177L融合蛋白。通过本发明，将获得非洲猪瘟I177L基因的表达载体，实现I177L基因在大肠杆菌中的表达，获得纯化的GST‑I177L融合蛋白。