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公开(公告)号：CN113151111B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN202110554119.3
申请日：2021-05-20
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一株肉葡萄球菌及其在固态发酵制作酱曲中的应用。所述肉葡萄球菌菌株分离自传统固态发酵过程的酱曲样品，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.21620，保藏日期为2021年1月13日。该肉葡萄球菌与米曲霉混合固态发酵制备酱曲时，对米曲霉菌丝生长的抑制作用较小，而扫描电镜观察到其能直接吸附在米曲霉菌丝上，说明其能与米曲霉发生直接相互作用的细菌菌株。混合制曲48小时时，酱曲的蛋白酶活较米曲霉单独制曲时提高了40％，表现出良好的工业应用性能。
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公开(公告)号：CN114703158A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210230270.6
申请日：2022-03-10
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种提高转糖基活性和提升L‑抗坏血酸葡萄糖苷产物L‑抗坏血酸‑2‑α‑葡萄糖苷（2‑O‑α‑D‑glucopyranosyl‑L‑ascorbic acid,AA‑2G）纯度的蔗糖磷酸化酶突变体及其应用。本发明通过对SEQ ID.1所示氨基酸序列第134位脯氨酸、第341位亮氨酸和第343位亮氨酸中的一种或多种进行单点突变或多点组合突变，使得蔗糖磷酸化酶突变体比酶活提升1~2倍，合成AA‑2G浓度可达205 g/L，合成L‑抗坏血酸糖苷产物中AA‑2G占比达92~99%，这些突变体具有更好的工业应用特性。
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公开(公告)号：CN113444702A
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN202110656803.2
申请日：2021-06-11
申请人： 奥锐特药业股份有限公司 , 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了烯酮还原酶突变体及其在不对称加氢制备布瓦西坦中间体的应用。所述突变体是通过对氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的野生型烯酮还原酶进行突变改造后得到的突变体。该烯酮还原酶突变体在不对称还原4‑丙基‑2(5H)‑呋喃酮(化合物II)制备目标产物布瓦西坦中间体(R)‑4‑正丙基二氢呋喃‑2(5H)‑酮(化合物I)中表现出显著性的优点。将该突变体酶通过大肠杆菌过量表达后用于催化反应，并以化合物II为底物，在NAD(P)+/NAD(P)H辅酶循环系统辅助下，进行不对称C＝C加氢还原反应，制备布瓦西坦中间体(化合物I)，其底物转化率>99％，布瓦西坦中间体产物的ee值>99％，表现出良好的工业应用性能。
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公开(公告)号：CN109295119B
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN201811213157.7
申请日：2018-10-18
申请人： 浙江宏元药业股份有限公司 , 浙江工业大学
IPC分类号： C12P13/00
摘要： 本申请提供了一种生产他汀类药物中间体A7的生物催化方法，包括以下步骤：以(3R,5S)6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯即D3为底物，所述底物D3一次性投料20‑150g/L；以卤代醇脱卤酶为催化剂；底物NaCN水溶液根据反应液pH不断流加，反应液pH的控制方法为阶梯式提高，从最初的pH7.0提高至pH9.0；添加终浓度0.2‑1.5v/v％叔丁醇作为D3和A7的促溶剂和水解抑制剂，在25‑45℃条件下，反应1.5‑4h，最终获得产物阿托伐他汀类药物中间体A7。本发明针对A7生物催化过程的水解问题提供有效的解决方法，用以提高催化过程的生产率和A7收率。
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公开(公告)号：CN112143764A
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN202011014184.9
申请日：2020-09-24
申请人： 奥锐特药业股份有限公司 , 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种生物酶催化制备布瓦西坦中间体化合物的方法，所述布瓦西坦中间体化合物结构如式(I)所示，所述方法以化合物(II)为底物，以N‑乙基马来酰亚胺还原酶为催化剂，经不对称加氢反应制得到化合物(I)；所述N‑乙基马来酰亚胺还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明选择化合物(II)作为布瓦西塔合成的手性中间体，其易于制备，且酶催化的加氢反应速率快，转化率高，易于进行下一步反应；(2)本发明使用采用N‑乙基马来酰亚胺还原酶shiNEMR、camNEMR、cfrNEMR，可实现一步法的高效率和高对映体选择性生产化合物I，底物转化率>99％，对映体选择>98％。
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公开(公告)号：CN110903991A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911103534.6
申请日：2019-11-13
申请人： 浙江新银象生物工程有限公司 , 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种含高拷贝数人源溶菌酶基因的重组毕赤酵母工程菌及其应用，所述重组毕赤酵母工程菌是将SEQ ID NO.1所示溶菌酶基因以高拷贝数整合毕赤酵母基因组而获得。本发明采用两种质粒介导的重组菌构建方法，得到拷贝数为15的重组菌；重组菌产溶菌酶酶活高，120-140h内发酵酶活180-220KU/mL。
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公开(公告)号：CN109762033A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910072965.4
申请日：2019-01-25
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法：将质量浓度8-10％甘油葡萄糖苷水溶液在50-60℃、-0.02～-0.04MPa的条件下浓缩至甘油葡萄糖苷质量浓度为50-55％，获得浓缩液；向浓缩液中加入4-6倍体积的含有体积浓度1-7％石油醚的有机溶剂，在70-80℃下回流反应50-80min后，缓慢降温至45-55℃，趁热加入分子筛或浓硫酸，室温放置40-48h，4-8℃冰箱中冷却结晶2-8天，在相对湿度为10-20％的条件下抽滤，滤饼真空干燥，获得甘油葡萄糖苷晶体；采用本发明方法最终可以得到GG的晶体，且适于GG的大规模生产，收率达到51％，纯度达到86％。
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公开(公告)号：CN109652481A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811635783.5
申请日：2018-12-29
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种环糊精糖基转移酶在生产α-糖基橙皮苷中的应用，本发明构建的生产α-糖基橙皮苷的菌剂的活性成分为大肠杆菌IEF-cgt02，能够在胞内高效合成热稳定性环糊精葡萄糖基转移酶，以糊精为糖基供体，高效催化对橙皮苷的糖基化反应；本发明的菌剂生物催化生产2-15％的α-糖基橙皮苷，反应24小时以内，橙皮苷的转化率在70％以上，具有底物投料量高、催化速率快、底物转化率高的特点，适用于工业化生产α-糖基橙皮苷。
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公开(公告)号：CN108913641A
公开(公告)日：2018-11-30
申请号：CN201810696239.5
申请日：2018-06-29
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其应用，所述重组大肠杆菌是将SEQ ID NO.1所示的来源于长双歧杆菌IEF101的L-抗坏血酸糖基化酶基因转入大肠杆菌宿主细胞获得的。本发明采用生物法一步催化转化高效生产单一糖基化产品AA-2G；本发明重组大肠杆菌E.coli IEF-blsp101能够在胞内高效合成蔗糖磷酸化酶，并以L-抗坏血酸和蔗糖为底物，高效催化L-抗坏血酸的糖基化反应，45-72h内催化得到90-100g/L的AA-2G，平均生产强度大于1.3g·L-1·h-1。
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公开(公告)号：CN107245471A
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201710512409.5
申请日：2017-06-29
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种重组吸水链霉菌及其在提高井冈霉素A产量中的应用，所述重组吸水链霉菌是将糖基转移酶基因valG、UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶基因galU和葡萄糖磷酸变位酶基因pgm导入吸水链霉菌获得的。本发明所述工程菌S.hygroscopicus 5008‑valG‑galU‑pgm发酵产井冈霉素A的量为6.103g/L，相同情况下原始菌株产量为5.366g/L，工程菌比原始吸水链霉菌株井冈霉素A产量提高了13.73％，同时井冈霉素A与井冈羟胺A的比值从3.972提高到了4.458，井冈羟胺A的积累也明显降低。
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