公开(公告)号：CN118165960B

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202410340391.5

申请日：2024-03-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 任鑫坤 ,  余克洋 ,  王骞 ,  曹家南 ,  肖奡

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。

公开(公告)号：CN118792291A

公开(公告)日：2024-10-18

申请号：CN202411003605.6

申请日：2024-07-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 任鑫坤 ,  曹家南 ,  王骞 ,  余克洋 ,  范鑫龙

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高立体选择性的D‑苏氨酸醛缩酶突变体及其应用，所述突变体由野生型D‑苏氨酸醛缩酶定向进化得到，包括第146位天冬酰胺变为甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺中的任意一种，和/或第147位精氨酸突变为苯丙氨酸、酪氨酸中的任意一种，和/或第148位半胱氨酸突变为苯丙氨酸，和/或第177位酪氨酸突变为苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸中的任意一种，和/或第312位丝氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸中的任意一种。本发明提供的D‑苏氨酸醛缩酶突变体在合成D‑thero对甲砜基苯丝氨酸时具有较高的Cβ立体选择性和产率；应用所述突变体的反应条件温和、易于实现，在医药化工领域具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN118726326A

公开(公告)日：2024-10-01

申请号：CN202410754413.2

申请日：2024-06-12

Applicant: 南京大学

Inventor： 任鑫坤 ,  甘忠文 ,  曹家南 ,  董佳敏 ,  王子妍

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P7/22

Abstract: 本发明公开了一种酚酸脱羧酶突变体及其制备和应用，所述突变体是将SEQ IDNo.1所示氨基酸序列第40位、第92位、第131位这三个位点中至少有一个氨基酸进行突变；第40位异亮氨酸Ile突变为缬氨酸Val；第92位异亮氨酸Ile突变为苏氨酸Thr、缬氨酸Val、中的任意一种；第131位缬氨酸Val突变为亮氨酸Leu。本发明所述酚酸脱羧酶突变体，通过定点突变的方法进行改造，从而改变氨基酸序列，实现蛋白结构和功能的改变，酶活性提高，对阿魏酸的催化活性相对于原始酶大幅提高。

公开(公告)号：CN118165960A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410340391.5

申请日：2024-03-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 任鑫坤 ,  余克洋 ,  王骞 ,  曹家南 ,  肖奡

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。