公开(公告)号：CN105911035B

公开(公告)日：2018-07-03

申请号：CN201610235811.9

申请日：2016-04-15

Applicant: 云南大学

Inventor： 邹成钢 ,  陆朝军 ,  张克勤 ,  卞静

IPC: G01N21/64

Abstract: 一种快速鉴定南方根结线虫二龄幼虫体外生存状态的方法，用尼罗红染二龄幼虫脂肪，根据虫体的着色部位鉴定出二龄幼虫的生存状态。即：将150‑180条二龄幼虫加入无菌水中，向其加1μl 0.5mg/m尼罗红溶液，25℃放置4h后，每隔24h置于用波长为580‑630mm的黄绿色激发光曝光120毫秒，观测和记录荧光值；当线虫口针到口器顶部的头部呈现出明显的橘红色荧光，判定线虫为死亡状态；当线虫头部基本没有荧光，判定线虫为非死亡状态。有益效果在于：操作简单、灵敏度高；多次检测且不影响二龄幼虫的活力；可降低假死给杀虫药物筛选带来的统计误差，减少筛选周期和成本。

公开(公告)号：CN107177672A

公开(公告)日：2017-09-19

申请号：CN201710406538.6

申请日：2017-06-02

Applicant: 云南大学

Inventor： 张颖 ,  张克勤 ,  张云润 ,  董建勇 ,  蒋力力

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种用于圆盘菌的标准基因序列及鉴定方法，属物种分子鉴定领域。所述标准检测线粒体mtLSU基因，基因序列SEQ ID NO.1。使用线粒体大亚基mtLSU基因通用引物ML7,ML8进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，再用特异引物序列ML‑chaoF：AGAACAACGGCTAGGTGG，ML‑chaoR：GAACGAGTCCGCAGAAGA进行扩增，PCR产物经过琼脂糖胶进行验证后测序。根据mtLSU基因的序列差异，可以快速准确的鉴定圆盘菌。本发明采用可靠的DNA分子鉴定技术，无需耗费大量的时间对其进行形态学鉴定，可以快速、准确的鉴定圆盘菌，为动植物线虫的防治提供有力的研究工具。

公开(公告)号：CN107022495A

公开(公告)日：2017-08-08

申请号：CN201710265538.9

申请日：2017-04-21

Applicant: 云南大学

Inventor： 牛雪梅 ,  张克勤 ,  王彦利 ,  桂小薇

IPC: C12N1/14 ,  A01N63/04 ,  A01P5/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及两株厚垣孢普克尼亚菌真菌及其应用，属于微生物菌种技术领域。厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00615和厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00111，保藏号分别为CGMCC No.9586和CGMCCNo.9585。厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00615和厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00111在制备抗线虫活性物质金轮霉素(aurovertins)及在抗根结线虫中的应用。本发明有以下的有益效果在于：厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00615和厚垣孢普克尼亚菌Pochonia chlamydosporia YMF1.00111中的PDB发酵液中含有达到800‑1500μg/mL含量的抗线虫活性物质金轮霉素，具有很强的毒杀线虫活性，能够在制备毒杀植物病原线虫制剂中应用。

公开(公告)号：CN106987539A

公开(公告)日：2017-07-28

申请号：CN201710265851.2

申请日：2017-04-21

Applicant: 云南大学

Inventor： 李国红 ,  闫俊梅 ,  王婷 ,  张克勤

IPC: C12N1/20 ,  A01N63/02 ,  A01P5/00 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12R1/01 ,  A01N63/02 ,  C12N1/20

Abstract: 一种细菌Lysobacter soli 6262发酵液及其应用。细菌Lysobacter soli 6262发酵液经细菌菌株筛选、及Lysobacter soli 6262发酵液的制备步骤得到。细菌菌株Lysobacter soli 6262已于2017年1月09日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号：CGMCC No.13555。细菌Lysobacter soli 6262发酵液在制备毒杀南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)生物制剂中应用。有益效果在于：高效低毒、不污染环境，能用于制备毒杀南方根结线虫(M.incognita)和秀丽隐杆线虫(C.elegans)的生物农药制剂。

公开(公告)号：CN106947781A

公开(公告)日：2017-07-14

申请号：CN201710265010.1

申请日：2017-04-21

Applicant: 云南大学

Inventor： 赵沛基 ,  柳成莽 ,  张克勤 ,  李国红

IPC: C12P1/02 ,  C12Q1/46 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种真菌拟盘多毛孢提取物及其应用，属于应用微生物学领域。真菌拟盘多毛孢提取物经真菌菌株选择、及拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5提取物的制备步骤得到。其真菌菌株是拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5,菌株GLGS‑5已于2017年1月9日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.13577。真菌拟盘多毛孢提取物在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂应用。本发明的有益效果在于：拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5固体发酵提取物活性好，对AChE抑制率达61.8％，能够作为制备乙酰胆碱酯酶抑制剂应用。

公开(公告)号：CN104313103B

公开(公告)日：2017-02-01

申请号：CN201410477645.4

申请日：2014-09-18

Applicant: 云南大学

Inventor： 牛雪梅 ,  张克勤 ,  李东娴 ,  王彦利

IPC: C12P33/00 ,  C12R1/80

Abstract: 本发明涉及一种真菌YMF 1.00864发酵液及其应用，属于应用微生物学技术领域。本发明的真菌YMF 1.00864发酵液，用保藏号为CGMCC No.7407的青霉(Penicillium sp.)YMF 1.00864菌种经真菌的培养和发酵液的收集和萃取步骤得到。本发明的真菌YMF 1.00864发酵液在制备分离胆酸及鹅去氧胆酸中的应用。本发明的有效果在于：首次从真菌发酵液中生产制备胆酸及鹅去氧胆酸，由于真菌易培养、周期短及可再生，为胆酸及鹅去氧胆酸的生产提供了一条新资源以及新技术方法。

公开(公告)号：CN105238796A

公开(公告)日：2016-01-13

申请号：CN201510569031.3

申请日：2015-09-09

Applicant: 云南大学

Inventor： 张颖 ,  刘春丽 ,  徐建平 ,  余泽芬 ,  张克勤

IPC: C12N15/31 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明涉及鸡油菌复合种的标准基因及分子鉴定方法，属真菌物种鉴定领域。本发明引物序列：RPB1-S 5'-TTTGGGCGGTGAGGACTA-3'，RPB1-A 5'-GTGGGACGGGTAAGACAG-3'，该通用引物可针对鸡油菌RNA聚合酶Ⅰ大亚基基因（RPB1）基因进行扩增，获得标准检测基因。根据RPB1基因DNA序列的差异，可以快速准确鉴定鸡油菌复合种内的各个物种。本发明的有益效果在于：RPB1基因克服了传统鸡油菌形态不易鉴定的缺点，具有通用、易扩增、易比对的特点，其鉴定的可靠性和准确性也大大提高，为鸡油菌的种质资源挖掘、保护和利用提供有力的研究工具。

公开(公告)号：CN104928198A

公开(公告)日：2015-09-23

申请号：CN201510360421.X

申请日：2015-06-26

Applicant: 云南大学

Inventor： 乔敏 ,  余泽芬 ,  贾东晨 ,  张克勤

IPC: C12N1/16 ,  A01N63/04 ,  A01P3/00 ,  C12R1/74

CPC classification number: C12R1/74 ,  A01N63/04

Abstract: 本发明涉及一株热带假丝酵母(Candida tropicalis)QJZTout1-2菌株及其应用，属于微生物生防防治技术领域。本发明的热带假丝酵母(Candida tropicalis)QJZTout1-2菌株，保藏号为：CGMCC No.8688。本发明的热带假丝酵母(Candida tropicalis)QJZTout1-2菌株在制备抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢生防制剂中的应用。本发明有益效果在于：1、酵母菌株QJZTout1-2能有效抑制病原菌灰葡萄孢，培养物对果蔬采后病原菌灰葡萄的抑制效果>60%。2、弥补了果蔬采后病原菌灰葡萄孢防治菌株来源和防治效果的不足，扩大了现行果蔬采后病防治生防菌的菌株来源和提高果蔬采后病生防效果。

公开(公告)号：CN104293677A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410138594.2

申请日：2014-04-08

Applicant: 云南大学

Inventor： 梁连铭 ,  杨金奎 ,  莫媛媛 ,  张克勤

IPC: C12N1/14 ,  A01N63/04 ,  A01P5/00 ,  C12R1/645

CPC classification number: C07K14/37 ,  A01N63/04

Abstract: 本发明涉及一种具有杀线虫功能的食线虫真菌寡孢节丛孢基因工程菌株及其应用，属生物农药技术领域。本发明的生产菌株为：寡孢节丛孢基因工程菌株（Arthrobotrys oligosporaΔMad1），保藏号为CCTCC M 2013439。寡孢节丛孢基因工程菌株在制备用于防治线虫制剂中的应用。本发明的有益效果在于：1、寡孢节丛孢基因工程菌株与出发菌株具有相同的生长速率和形态。其与野生菌株的不同之处在于当其培养在在含有0.1%-0.5%的硝酸钠或者0.1%-0.%的尿素或者0.1%-0.5%的酵母提取物的水琼脂培养基上时会产生比出发菌株提高2倍以上的粘性三维菌网。2、当菌株培养在固体CMA培养基上时，其捕捉线虫的能力提高5倍以上，24小时线虫捕捉率达95%以上，能够在制备杀线虫制剂中应用。

公开(公告)号：CN104004668A

公开(公告)日：2014-08-27

申请号：CN201410271485.8

申请日：2014-06-18

Applicant: 云南大学

Inventor： 杨金奎 ,  苏浩 ,  赵勇 ,  张克勤

IPC: C12N1/14 ,  C12N3/00 ,  A01P5/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种利用氨基酸诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，属于应用微生物学领域。本发明方法包括氨基酸溶液配制、捕食线虫真菌培养和孢子收集、氨基酸溶液浸泡孢子和捕食器官诱导步骤。其中：a.氨基酸溶液的配制中所用氨基酸为缬氨酸、亮氨酸或谷氨酸；b.捕食器官的诱导步骤中采用捕食线虫真菌的分生孢子，并通过氨基酸溶液进行浸泡的方式进行捕食器官的诱导。本发明的优点在于：通过培养和收集捕食线虫真菌的孢子，利用缬氨酸、亮氨酸或谷氨酸溶液进行侵泡，能够诱导捕食线虫真菌产生大量的捕食器官。本发明方法操作简单，重复性好，能够获得大量的捕食器官，为进一步研究捕食线虫真菌捕食器官形成的分子机制提供了良好的实验材料。