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公开(公告)号：CN115029374A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210729325.8
申请日：2022-06-24
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的pegRNA表达框及相应骨干载体和应用。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中，pegRNA表达框和融合蛋白表达框位于同一双元载体中，pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成。本发明的enpPE2引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率，并能获得纯合突变植株，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109652422B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201910098590.9
申请日：2019-01-31
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域，公开了一种高效的单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA及其应用。所述单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA能够对植物基因组进行剪切且具有：(a)SEQ ID No：1所示的核苷酸序列；或者(b)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且仍能够进行植物基因组剪切的核苷酸序列。本发明提供的单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA能够在植物特别是水稻中高效地进行由C/G到T/A的单碱基编辑。
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公开(公告)号：CN112522302B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202011459058.4
申请日：2020-12-11
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所 , 合肥丰乐种业股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种水稻双向单碱基编辑的共转录单元基因ABE‑CBE系统、载体及其应用，所述共转录单元基因ABE‑CBE包括腺嘌呤脱氨酶的编码基因TadA和胞嘧啶脱氨酶编码基因CDA，所述共转录单元基因mutant TadA与LjCDAL1的编码序列构建于同一表达载体中。本发明融合了包含胞嘧啶碱基编辑器和腺嘌呤碱基编辑器的表达载体，造成基因组特异位点的核苷酸替换，实验证明，利用本发明设计的融合编辑工具构建植物表达载体，进而构建水稻靶向编辑载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T至G:C相互替换的效率提升，可以在基因的特异位点实现C到T和A到G的同时替换，扩展了应用范围的同时减少了脱靶的产生。使得融合的A‑C base editing系统具有更广泛地应用前景。
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公开(公告)号：CN112725348B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN201911029085.5
申请日：2019-10-28
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT，还提供包含该ABEHPT的一种表达载体，以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后，能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因，通过潮霉素筛选，提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量，从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明，利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升，在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN112746084A
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN201911054343.5
申请日：2019-10-31
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种实现单轮筛选全阳性的肉眼可视水稻基因筛选方法，所述方法包括培养愈伤组织；合成序列表中SEQ ID No.1中所示序列的筛选标记基因，扩增后连接于载体中形成植物表达载体，转入根癌农杆菌；将愈伤组织与农杆菌接触10‑30分钟，其中，所述农杆菌中引入了所述植物表达载体，所述植物表达载体中携带所述筛选标记基因；进行愈伤组织培养；取带有颜色、状态良好的愈伤组织进行分化再生。并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在遗传转化方面的应用。本发明利用Cb基因构建植物表达载体，导入水稻细胞后造成水稻转化阳性愈伤呈深绿色。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112626049A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011481713.6
申请日：2020-12-14
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRRH基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRRH突变体，发现利用该SpCas9‑NRRH突变体进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRRH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
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公开(公告)号：CN110878305A
公开(公告)日：2020-03-13
申请号：CN201911249683.3
申请日：2019-12-09
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H4/00 , A01H5/00 , A01H6/46
Abstract: 本发明提供了一种高效的单碱基编辑系统OsSpCas9-eCDA及其应用和育种方法。本发明通过大量的实验，尝试采用不同的方式对SpCas9-ABE进行改造，终于成功获得了一个高单碱基编辑效率、宽窗口的CP1249-OsSpCas9-eABE编辑器。并且本发明还提供了包含该CP1249-OsSpCas9-eABE基因的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的CP1249-OsSpCas9-eABE基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换，特别是实现由A/T碱基突变成C/G。利用该编辑器进行水稻基因编辑，可以编辑更多的突变体，获得更多的随机突变或者得到突变更多的突变体库。
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公开(公告)号：CN105602956B
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201610188718.7
申请日：2016-03-25
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供一种水稻花粉强表达启动子OsPoll4及其应用。本发明还提供了含有该启动子的表达盒、作物表达载体以及利用其驱动目标基因表达的方法。具体而言，本发明的发明人发现并提取了日本晴水稻中一段1864bp的DNA序列，发明人发现该序列具有驱动基因在花粉中强表达的能力，并且对上述能力进行了鉴定，将其命名为OsPoll4。本发明将上述启动子应用在作物基因工程中。由于本发明提供的启动子可以特异地驱动外源基因在花粉中强表达，其具有分析花粉发育过程中重要基因的功能，对水稻花粉发育及相关的基础生物学研究具有重要的理论意义，而且对杂交稻及水稻转基因育种具有重要的实际意义。
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公开(公告)号：CN104762302B
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201510164459.X
申请日：2015-04-08
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了一种植物基因序列。本发明从日本晴水稻中分离克隆和鉴定了一个镉(Cd)强烈诱导的水稻特异基因的启动子Cd S2，并对获得的转基因水稻进行镉(Cd)处理，经过GUS化学染色发现，在处理后转基因植株在各个部位都有明显的染色。且通过RT‑qPCR鉴定处理前后的Gus基因表达量分析发现，镉(Cd)处理后，转基因植株中的Gus基因表达量是处理前的887.9倍，达到组成型启动子ACTIN活性的4倍。该启动子能够用于通过其在水稻中的表达量来反应土壤中镉污染的强度，其操作简单、检出限低、微量灵敏且准确度高的特性，对从研究环境关系到改善生态环境，在可持续发展中发挥重要意义，并且可以积极地对形成污染的原理进行分析，进一步为它们避免与可控转化提供宝贵经验。
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公开(公告)号：CN105861506B
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201610389751.6
申请日：2016-05-31
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种水稻胚乳不表达启动子SAFES2及其分离方法与应用。本发明的发明人发现、提取并鉴定了日本晴水稻中一段具有转录调控活性的DNA序列，命名为启动子SAFES2或SAFES2。该启动子的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1中所示序列或为该序列的同源衍生物。本发明利用作物双元表达载体pCAMBIA1391，将启动子SAFES2构建于GUS报告基因上游，构建重组表达载体，通过农杆菌介导转化水稻愈伤组织再生水稻植株，GUS染色实验证实该启动子是胚乳不表达启动子。采用本发明的启动子与具有提高植株生长特性的基因配合使用，可以在提高植株根、茎、叶等躯干部位性状的同时，避免对植株胚乳部分带来任何不良影响，具有显著的应用价值和远期前景。
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