公开(公告)号：CN111944847A

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN202010889546.2

申请日：2020-08-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李鹏程 ,  李欣憶 ,  唐宝莹 ,  魏泽辉

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一套等位基因高效替换系统及其建立方法。该系统依赖于一套双筛选表达盒，所述双筛选表达盒针对位于两条姐妹染色单体的等位基因，分别引入了两种不同的荧光蛋白、两种不同的抗性基因，并分别添加胸腺激酶负向筛选基因。利用该表达盒和对应的基因替换系统，我们提供了一种新的基于SSA修复机制的精确编辑思路，可以在实现高效基因组精确编辑的同时，有效避免传统基于Cre/LoxP重组酶系统的LoxP序列残留、转座子系统敲出的筛选基因序列在基因组“跳跃”造成的插入，以及同源重组修复系统二次HDR筛选效率低等问题，为基因组精确编辑提供了一条简洁高效的新思路。

公开(公告)号：CN106011171B

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种基因无缝编辑方法。该方法构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5.CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体；随后通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。

公开(公告)号：CN106011171A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体，所述CCR5‑Donor质粒载体具有pXL‑BACII‑L‑arm‑CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA ‑R‑arm结构，其中，L‑arm和R‑arm为左右同源臂，L‑arm和R‑arm中间的CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA为筛选标记组件；通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。

公开(公告)号：CN111925980A

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN202010861528.3

申请日：2020-08-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 魏泽辉 ,  王丹 ,  李鹏程 ,  祝梦琦 ,  董小琳 ,  贾存灵 ,  徐坤 ,  张智英

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种鸡卵泡颗粒的体外培养方法。具体技术方案为：一种细胞培养基，在M199基础培养基中，添加1wt％的双抗，1wt％的复合维生素、1wt％的非必需氨基酸、5wt％的鸡血清。本发明提供了一种新的、针对鸡卵颗粒细胞的培养基，并进一步提供了培养方法。使用该培养基和培养方法，可有效增强鸡颗粒细胞在体外培养下的贴壁能力和增殖能力。