公开(公告)号：CN106011171B

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种基因无缝编辑方法。该方法构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5.CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体；随后通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。

公开(公告)号：CN106011171A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体，所述CCR5‑Donor质粒载体具有pXL‑BACII‑L‑arm‑CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA ‑R‑arm结构，其中，L‑arm和R‑arm为左右同源臂，L‑arm和R‑arm中间的CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA为筛选标记组件；通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。