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公开(公告)号:CN102358891A
公开(公告)日:2012-02-22
申请号:CN201110286503.6
申请日:2011-09-23
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了牛体细胞病毒诱导方法。本发明通过慢病毒多次感染牛成纤维细胞后能够简单、高效、快速地引起细胞发生诱变,诱变的细胞在形态和生长性能等方面呈现特征性变化,表现出一定的干细胞特征,诱变形成的细胞改变原有的纤维状形态而呈现细胞集落团,细胞集落生长迅速、形态稳定,常规的冻存和传代对细胞生长性能无明显影响。牛体细胞病毒诱导方法诞生的诱变细胞将会作为一种新型的细胞材料在牛的转基因克隆、新品种培育、育种改良及细胞基因表达调控等方面发挥重要的作用,同时,也为人类及其他物种的细胞提供借鉴和参考。
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公开(公告)号:CN103215221A
公开(公告)日:2013-07-24
申请号:CN201310071009.7
申请日:2013-03-06
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明公开了山羊卵丘细胞体外培养抗凋亡处理方法,包括以下步骤:(1)卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养挑取的卵丘卵母细胞复合物经操作液清洗后,置于成熟液中,培养时,将维甲酸添加到成熟液中,50~80个卵丘卵母细胞复合物/孔,覆盖矿物油,于饱和湿度下,38.5°C培养;所述操作液组分为TCM199+5%FBS+100IU/ml青霉素+0.1mg/ml链霉素;所述成熟液组分为TCM199+10%FBS+10IU/mlPMSG+5IU/mlhCG +0.1mg/mlL-半胱氨酸+10ng/mlEGF;(2)卵丘细胞凋亡相关基因表达检测(3)卵丘细胞凋亡末端标记检测。本发明在山羊卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养过程中,添加维甲酸(RA)能够有效地抑制卵母细胞外周卵丘细胞的凋亡,进而促进山羊卵母细胞细胞核与细胞质的成熟。
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公开(公告)号:CN102719361A
公开(公告)日:2012-10-10
申请号:CN201210203962.8
申请日:2012-06-20
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种组织培养器皿与组织培养方法。组织培养器皿包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿,培养皿包括盖子,内腔中还包括至少一个碗状容器,碗状容器包括半球形的碗底与开口,开口处设有与碗状容器侧壁垂直的边挡,边挡的内缘直径小于开口,外缘直径大于开口;碗状容器底部与培养皿底壁连接。组织培养方法包括如下步骤:(1)用亲水性明胶包被碗状容器;(2)添加培养液;(3)切割和加入组织块;(4)倒置培养皿后放入培养箱。本发明通过在普通培养皿的内腔设置碗状容器,营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境,其使用方便、成本较低、效果较好,特别适宜体积较小和密度较大的组织块的培养。
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公开(公告)号:CN102703423A
公开(公告)日:2012-10-03
申请号:CN201210195070.8
申请日:2012-06-14
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种小鼠淋巴细胞诱变方法,包括以下步骤:(1)淋巴细胞的分离;(2)小鼠ES细胞的培养;(3)淋巴细胞与ES细胞的融合;(4)诱变细胞的分离培养。淋巴细胞作为动物机体内的一种重要组成细胞,具有来源广泛、取材方面等优点,本发明借助细胞融合技术诱导小鼠淋巴细胞转变形成干细胞,形成的干细胞具有小鼠ES细胞的形态、基因表达、体外分化能力等特征,有效避免了病毒在干细胞诱导中的潜在危害。因此,该方法将为小鼠体细胞转变成干细胞并得到广泛应用奠定基础,同时,也为动物或人类的干细胞研究和利用提供重要借鉴。
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公开(公告)号:CN102696484A
公开(公告)日:2012-10-03
申请号:CN201210204315.9
申请日:2012-06-20
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种组织培养器皿与组织培养方法。组织培养器皿包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养器皿,内腔中还包括至少一个托盘和支架,托盘底设有通孔;所述托盘设在支架上。组织培养方法包括如下步骤:(1)对托盘表面疏水性处理;(2)托盘架设在支架上并向支架所在培养皿内加入组织培养液;(3)加入组织块放入培养箱中培养。本发明通过在普通培养皿的结构上增加用支架支撑的托盘,营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境,使得所培养的组织在该环境中既能接触空气,又能保持营养供给,并且取出组织时不易造成破碎,具有使用方便、成本低廉、培养效果好、更适合表面积较大或组织密度较小的组织块的培养。
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公开(公告)号:CN102690782A
公开(公告)日:2012-09-26
申请号:CN201210194864.2
申请日:2012-06-14
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种成纤维细胞培养液,由以下组分组成:10%胎牛血清,4ng/ml碱性成纤维细胞生长因子,2.5μg/mlPlasmocin,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素,高糖DMEM培养液补足到100%。本发明设计的成纤维细胞培养液与常规的成纤维细胞培养液相比,能使成纤维细胞生长速度快,增殖能力强,培养的成纤维细胞具有典型的纤维状形态,及具有更强的抗凋亡能力而不易衰老。因此,本发明设计的成纤维细胞培养液培养的成纤维细胞应用于生产实践将会生产出更高质量和效率的细胞工程产品。
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公开(公告)号:CN101940550A
公开(公告)日:2011-01-12
申请号:CN201010273948.6
申请日:2010-09-02
Applicant: 安徽农业大学 , 合肥博大牧业科技开发有限责任公司
Abstract: 本发明涉及促性腺激素释放激素脂质体的制备方法。该方法的具体操作步骤是:将磷脂酰胆碱和胆固醇按照3∶1(w/w),加入6ml混合有机溶剂(氯仿∶甲醇1∶1,V/V)溶解或6ml无水乙醇溶解,在氮气流下加入促性腺激素释放激素(GnRH)溶液,在旋转蒸发仪上旋转预热30min,然后在水浴式超声仪中进行低温超声分散后,将得到的脂质体悬液进行滤菌处理,即可制得促性腺激素释放激素(GnRH)脂质体。本发明制得的促性腺激素释放激素脂质体可作为哺乳动物免疫去势的药物制剂,用于各种哺乳动物的免疫去势。本发明制剂使用方便,效果显著,安全可靠,稳定性好,易于保存。
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公开(公告)号:CN102277402B
公开(公告)日:2013-07-03
申请号:CN201110204137.5
申请日:2011-07-20
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12P21/02 , C07K14/435 , C07K1/14
Abstract: 本发明公开了一种动物细胞内核蛋白提取方法。该方法通过利用细胞穿透肽、外源核蛋白和绿色荧光蛋白共同构建重组核蛋白表达载体,介导重组核蛋白在细胞核内表达,待重组核蛋白在细胞内表达稳定后,使用操作液处理细胞,收集细胞,超声波破碎,离心去沉淀后收集细胞上清液,上清液过滤除菌后添加到细胞培养液中,4h后提取的荧光标记外源重组核蛋白通过细胞质进入细胞核并定位于细胞核内。利用该方法提取的核蛋白能够发挥蛋白功能使细胞发生形态特征的改变,结果证实本发明能够简单、快速、高效地提取具有生物活性的细胞内核蛋白。
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公开(公告)号:CN103115812A
公开(公告)日:2013-05-22
申请号:CN201310022665.8
申请日:2013-01-22
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N1/31 , G01N33/533
Abstract: 本发明公开了胚胎免疫荧光染色操作皿及其制备方法。胚胎免疫荧光染色操作皿包括操作皿和以琼脂糖凝胶制成的底衬;底衬贴附在操作皿的内腔底面,底衬上表面设有凹坑。其中,凹坑为半圆形。制备方法是(1)将设有半圆形凸起的模具固定在培养皿的上盖内腔的顶面;(2)用琼脂糖粉末与水或DPBS/PBS溶液制成琼脂糖凝胶;(3)将琼脂糖凝胶倒入培养皿,使模具上的半圆形凸起与琼脂糖凝胶的液面接触;(4)待琼脂糖凝胶凝固后取下模具,即可使用;也可盖上盖子封好后4℃保存待用。本发明在组织培养皿中设置以琼脂糖凝胶制成底衬,使得胚胎免疫荧光染色操作直接在底衬上完成,避免了操作中胚胎与组织培养皿板壁发生直接接触而产生的粘连、变形、移位和窜孔等问题。
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公开(公告)号:CN102268404A
公开(公告)日:2011-12-07
申请号:CN201110204169.5
申请日:2011-07-20
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 本发明公开了一种猪卵丘干细胞的分离方法。其方法是抽取青年母猪卵丘卵母细胞复合物,卵母细胞体外成熟培养后,消化脱离卵丘细胞,收集消化的卵丘细胞进行培养,待有细胞集落出现并形成较大的细胞集落后,消化传代接种到饲养层上,在含有细胞因子的培养液中进行培养,分离培养的卵丘干细胞具有鸟巢状细胞生长形态,细胞圆形、核较大,细胞表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog、SSEA1,体外分化能够形成来源于三个胚层的神经细胞、肌肉细胞和肝脏细胞,结果显示从猪卵丘细胞中分离培养了卵丘干细胞。
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