公开(公告)号：CN103215221A

公开(公告)日：2013-07-24

申请号：CN201310071009.7

申请日：2013-03-06

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 蒲勇 ,  曹鸿国 ,  章孝荣 ,  王张帆 ,  卞雅尼 ,  张运海 ,  刘亚 ,  李运生 ,  方富贵 ,  陶勇

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了山羊卵丘细胞体外培养抗凋亡处理方法，包括以下步骤：（1）卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养挑取的卵丘卵母细胞复合物经操作液清洗后，置于成熟液中，培养时，将维甲酸添加到成熟液中，50～80个卵丘卵母细胞复合物/孔，覆盖矿物油，于饱和湿度下，38.5°C培养；所述操作液组分为TCM199+5%FBS+100IU/ml青霉素+0.1mg/ml链霉素；所述成熟液组分为TCM199+10%FBS+10IU/mlPMSG+5IU/mlhCG +0.1mg/mlL-半胱氨酸+10ng/mlEGF；（2）卵丘细胞凋亡相关基因表达检测（3）卵丘细胞凋亡末端标记检测。本发明在山羊卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养过程中，添加维甲酸（RA）能够有效地抑制卵母细胞外周卵丘细胞的凋亡，进而促进山羊卵母细胞细胞核与细胞质的成熟。