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公开(公告)号：CN102115762A
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN200910247524.X
申请日：2009-12-30
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明属基因工程制药技术及应用领域，涉及一种建立高效表达人环氧合酶2的重组人肠癌细胞株HCT-116COX-2的方法及应用。本发明方法通过建立稳定转染含人环氧合酶2基因启动子编码序列和荧光素酶报告基因序列的永生化哺乳动物细胞系，经压力筛选和基因扩增后，获得稳定、灵敏、高效表达人环氧合酶2的肿瘤克隆细胞株，并将该细胞株应用于以人环氧合酶2基因为靶点的抗肿瘤药物的筛选及评价。本发明建立的重组人肠癌细胞株具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点，具有可观的应用前景。
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公开(公告)号：CN101624599B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN200810040524.8
申请日：2008-07-11
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种含有COX-2基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过提取人COX-2基因启动子，以含萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic的质粒为载体，插入COX-2基因启动子，构建一种含COX-2基因启动子和萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic-COX-2 promoter重组质粒。将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒共转染到肿瘤细胞中，使其稳定表达。通过检测荧光素酶的活性反映COX-2基因启动子启动转录的活性，用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点，适用于以COX-2基因为靶点的抗肿瘤药物大批量筛选。
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公开(公告)号：CN102899344A
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201210461114.7
申请日：2012-11-16
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明公开了一种含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，其中，该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。该重组质粒的制备方法包含：步骤1，对载体质粒进行扩增和抽提；步骤2，对VEGFA基因的3′UTR序列进行克隆、酶切及纯化；步骤3，进行所述的VEGFA基因的3′UTR序列与所述的载体质粒的连接；步骤4，筛选重组子。本发明提供的含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，在筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等方面就有极佳的应用前景。
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公开(公告)号：CN102335438A
公开(公告)日：2012-02-01
申请号：CN201110217231.4
申请日：2011-08-01
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院 , 上海市普陀区中心医院
Abstract: 本发明涉及一种含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，该用途主要是通过HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，进行含HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径，达到预防恶性肿瘤发生和减缓肿瘤进程的目的。该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列，其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列。本发明提供的重组质粒制备的抗肿瘤药物，通过含HIPK2基因重组质粒补充HIPK2，可抑制肿瘤细胞的生物学进程，达到预防恶性肿瘤发生和减缓肿瘤进程的效果，同时与现有治疗手段相比能大幅度降低对机体的杀伤性和毒副作用。
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公开(公告)号：CN103083250A
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201310022754.2
申请日：2013-01-22
Applicant: 上海中医药大学附属曙光医院 , 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明公开了一种丹参酮ⅡA-聚乳酸/羟基乙酸微球及其制备方法，该微球采用水包油型乳化-液中干燥法制备，其油相为聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液，水相为聚乙烯醇的水溶液；微球中丹参酮ⅡA的载药量为1%~10%，包封率为60%~90%，微球粒径范围为30～200mm。本发明提供的丹参酮ⅡA-聚乳酸/羟基乙酸微球，适用于肝癌的介入治疗，具有良好的肝肿瘤末梢血管栓塞作用，有效栓塞时间为7～60天。能够靶向分布在肿瘤组织，缓释药物，提高药物局部浓度，延长药物代谢时间，明显抑制动物肝肿瘤生长，延长动物的生存期。微球栓塞后可抑制人低氧诱导因子1α和血管内皮生长因子的表达，减少肿瘤组织微血管密度。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101624599A
公开(公告)日：2010-01-13
申请号：CN200810040524.8
申请日：2008-07-11
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种含有COX-2基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过提取人COX-2基因启动子，以含萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic的质粒为载体，插入COX-2基因启动子，构建一种含COX-2基因启动子和萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic-COX-2 promoter重组质粒。将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒共转染到肿瘤细胞中，使其稳定表达。通过检测荧光素酶的活性反映COX-2基因启动子启动转录的活性，用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点，适用于以COX-2基因为靶点的抗肿瘤药物大批量筛选。
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公开(公告)号：CN103083250B
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201310022754.2
申请日：2013-01-22
Applicant: 上海中医药大学附属曙光医院 , 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明公开了一种丹参酮ⅡA-聚乳酸/羟基乙酸微球及其制备方法，该微球采用水包油型乳化-液中干燥法制备，其油相为聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液，水相为聚乙烯醇的水溶液；微球中丹参酮ⅡA的载药量为1%~10%，包封率为60%~90%，微球粒径范围为30～200mm。本发明提供的丹参酮ⅡA-聚乳酸/羟基乙酸微球，适用于肝癌的介入治疗，具有良好的肝肿瘤末梢血管栓塞作用，有效栓塞时间为7～60天。能够靶向分布在肿瘤组织，缓释药物，提高药物局部浓度，延长药物代谢时间，明显抑制动物肝肿瘤生长，延长动物的生存期。微球栓塞后可抑制人低氧诱导因子1α和血管内皮生长因子的表达，减少肿瘤组织微血管密度。
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公开(公告)号：CN102899421A
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201210461112.8
申请日：2012-11-16
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其中，该方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤3包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15-20μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。本发明提供的方法，可用来筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等。
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公开(公告)号：CN102277383A
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201110217195.1
申请日：2011-08-01
Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院 , 上海市普陀区中心医院
Abstract: 本发明涉及一种含HIPK2基因的重组质粒，该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列。其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列，该载体质粒是可以在宿主中复制和生存的真核表达质粒。该重组质粒的构建包括引物设计、PCR扩增、NheI和KpnI双酶切及纯化、目的片段和载体质粒的连接、连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及重组质粒酶切鉴定阳性克隆并测序等步骤。该重组质粒可用于HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，以及基于HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径。
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公开(公告)号：CN103173480A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201310065888.2
申请日：2013-03-01
Applicant: 上海中医药大学附属曙光医院 , 上海中医药大学附属普陀医院
Abstract: 本发明涉及一种质粒载体，所述的质粒载体包含人ABCB1基因的3′UTR序列和双荧光素酶基因。本发明还涉及一种筛选多药耐药相关microRNA的方法，它是将待测试microRNA和如上所述的质粒载体共转染多药耐药宿主细胞，以转染microRNA的多药耐药宿主细胞为对照，观测双荧光素酶活性的变化，确定待测试microRNA是否为多药耐药相关microRNA。本发明还涉及一种microRNA在制备逆转多药耐药的药物中的用途。使用本发明的方法筛选多药耐药相关microRNA具有快速、高效、简单易行的优点，为提高microRNA检测的灵敏度和特异性，以及研发和检测通过基因调控逆转多药耐药的药物开辟了新的途径。
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