公开(公告)号：CN102899344A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210461114.7

申请日：2012-11-16

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 李琦 ,  殷佩浩 ,  邱艳艳 ,  刘宣 ,  周利红 ,  王炎 ,  侯黎莉 ,  秦建民 ,  靳宝辉 ,  陈星竹 ,  王一斐 ,  叶乃菁 ,  胡送娇 ,  梁波 ,  郑媛红

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明公开了一种含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，其中，该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。该重组质粒的制备方法包含：步骤1，对载体质粒进行扩增和抽提；步骤2，对VEGFA基因的3′UTR序列进行克隆、酶切及纯化；步骤3，进行所述的VEGFA基因的3′UTR序列与所述的载体质粒的连接；步骤4，筛选重组子。本发明提供的含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，在筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等方面就有极佳的应用前景。

公开(公告)号：CN102335438A

公开(公告)日：2012-02-01

申请号：CN201110217231.4

申请日：2011-08-01

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院 ,  上海市普陀区中心医院

Inventor： 李琦 ,  范忠泽 ,  周利红 ,  王炎 ,  慈书俊 ,  李克桑 ,  秦建民 ,  陈星竹

IPC: A61K48/00 ,  C12N15/85 ,  A61K35/00

Abstract: 本发明涉及一种含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，该用途主要是通过HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，进行含HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径，达到预防恶性肿瘤发生和减缓肿瘤进程的目的。该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列，其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列。本发明提供的重组质粒制备的抗肿瘤药物，通过含HIPK2基因重组质粒补充HIPK2，可抑制肿瘤细胞的生物学进程，达到预防恶性肿瘤发生和减缓肿瘤进程的效果，同时与现有治疗手段相比能大幅度降低对机体的杀伤性和毒副作用。

公开(公告)号：CN102899421A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210461112.8

申请日：2012-11-16

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 殷佩浩 ,  李琦 ,  邱艳艳 ,  周利红 ,  刘宣 ,  王炎 ,  秦建民 ,  侯黎莉 ,  梁波 ,  胡送娇 ,  包益洁 ,  陈星竹 ,  靳宝辉 ,  宋大迁 ,  叶乃菁 ,  王一斐

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其中，该方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤3包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15-20μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。本发明提供的方法，可用来筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等。