公开(公告)号：CN102899421A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210461112.8

申请日：2012-11-16

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 殷佩浩 ,  李琦 ,  邱艳艳 ,  周利红 ,  刘宣 ,  王炎 ,  秦建民 ,  侯黎莉 ,  梁波 ,  胡送娇 ,  包益洁 ,  陈星竹 ,  靳宝辉 ,  宋大迁 ,  叶乃菁 ,  王一斐

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其中，该方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤3包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15-20μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。本发明提供的方法，可用来筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等。

公开(公告)号：CN103627720A

公开(公告)日：2014-03-12

申请号：CN201210232385.5

申请日：2012-07-06

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 范忠泽 ,  王金玉 ,  孙珏 ,  李琦 ,  赵成根 ,  张隆 ,  殷佩浩 ,  李大力 ,  叶乃菁

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，是包含ATP4B启动子序列、SV40T基因序列、以及携带绿色荧光蛋白GFP基因序列的载体质粒DNA序列的基因融合重组质粒；该真核表达载体通过以下步骤构建：步骤1，克隆ATP4B启动子序列；步骤2，将步骤1所得的ATP4B启动子序列插入携带GFP基因序列的载体质粒中，并进行验证；步骤3，将SV40T基因序列插入步骤2所得的携带ATP4B启动子序列和GFP基因序列的载体质粒，并进行酶切鉴定和测序。本发明提供的胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，对细胞无损伤，且具有经济简便的优点，并可以为进一步研究胃癌发生机制及开展胃癌的诊断与基因治疗奠定提供研究对象，奠定实验基础。

公开(公告)号：CN102899344A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210461114.7

申请日：2012-11-16

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 李琦 ,  殷佩浩 ,  邱艳艳 ,  刘宣 ,  周利红 ,  王炎 ,  侯黎莉 ,  秦建民 ,  靳宝辉 ,  陈星竹 ,  王一斐 ,  叶乃菁 ,  胡送娇 ,  梁波 ,  郑媛红

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明公开了一种含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，其中，该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。该重组质粒的制备方法包含：步骤1，对载体质粒进行扩增和抽提；步骤2，对VEGFA基因的3′UTR序列进行克隆、酶切及纯化；步骤3，进行所述的VEGFA基因的3′UTR序列与所述的载体质粒的连接；步骤4，筛选重组子。本发明提供的含有VEGFA基因3′UTR和报告基因的重组质粒，在筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等方面就有极佳的应用前景。

公开(公告)号：CN103173480A

公开(公告)日：2013-06-26

申请号：CN201310065888.2

申请日：2013-03-01

Applicant: 上海中医药大学附属曙光医院 ,  上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 隋华 ,  李琦 ,  朱惠蓉 ,  周利红 ,  刘宣 ,  季青 ,  靳宝辉 ,  潘树芳 ,  叶乃菁 ,  宋大迁 ,  范忠泽

IPC: C12N15/63 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/66 ,  A61K48/00 ,  A61P43/00

Abstract: 本发明涉及一种质粒载体，所述的质粒载体包含人ABCB1基因的3′UTR序列和双荧光素酶基因。本发明还涉及一种筛选多药耐药相关microRNA的方法，它是将待测试microRNA和如上所述的质粒载体共转染多药耐药宿主细胞，以转染microRNA的多药耐药宿主细胞为对照，观测双荧光素酶活性的变化，确定待测试microRNA是否为多药耐药相关microRNA。本发明还涉及一种microRNA在制备逆转多药耐药的药物中的用途。使用本发明的方法筛选多药耐药相关microRNA具有快速、高效、简单易行的优点，为提高microRNA检测的灵敏度和特异性，以及研发和检测通过基因调控逆转多药耐药的药物开辟了新的途径。

公开(公告)号：CN103110567A

公开(公告)日：2013-05-22

申请号：CN201310076397.8

申请日：2013-03-11

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 王炎 ,  李琦 ,  朱惠蓉 ,  秦建民 ,  范忠泽 ,  周利红 ,  陈红宇 ,  宋大迁 ,  叶乃菁

IPC: A61K9/00 ,  A61K31/58 ,  A61K47/34 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了一种载丹参酮IIA的纳米给药系统的制备方法，包含：步骤1，制备缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸环肽修饰的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸；步骤2，缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸环肽修饰的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸和丹参酮IIA摩尔比为1-60:1-60时，制备载丹参酮IIA的缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸环肽修饰的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸纳米粒。本发明还提供了该方法制备的载丹参酮IIA的纳米给药系统的用途。本发明提供的方法制备的载丹参酮IIA的纳米给药系统，能够有效的降低丹参酮IIA的毒性，增强其靶向性和治疗效果。