公开(公告)号：CN103627720A

公开(公告)日：2014-03-12

申请号：CN201210232385.5

申请日：2012-07-06

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 范忠泽 ,  王金玉 ,  孙珏 ,  李琦 ,  赵成根 ,  张隆 ,  殷佩浩 ,  李大力 ,  叶乃菁

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，是包含ATP4B启动子序列、SV40T基因序列、以及携带绿色荧光蛋白GFP基因序列的载体质粒DNA序列的基因融合重组质粒；该真核表达载体通过以下步骤构建：步骤1，克隆ATP4B启动子序列；步骤2，将步骤1所得的ATP4B启动子序列插入携带GFP基因序列的载体质粒中，并进行验证；步骤3，将SV40T基因序列插入步骤2所得的携带ATP4B启动子序列和GFP基因序列的载体质粒，并进行酶切鉴定和测序。本发明提供的胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，对细胞无损伤，且具有经济简便的优点，并可以为进一步研究胃癌发生机制及开展胃癌的诊断与基因治疗奠定提供研究对象，奠定实验基础。

公开(公告)号：CN101624599A

公开(公告)日：2010-01-13

申请号：CN200810040524.8

申请日：2008-07-11

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 李琦 ,  范忠泽 ,  周利红 ,  王金玉 ,  还一平 ,  殷佩浩 ,  秦建民 ,  孙珏 ,  许建华 ,  刘宁宁

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/66 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种含有COX-2基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过提取人COX-2基因启动子，以含萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic的质粒为载体，插入COX-2基因启动子，构建一种含COX-2基因启动子和萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic-COX-2 promoter重组质粒。将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒共转染到肿瘤细胞中，使其稳定表达。通过检测荧光素酶的活性反映COX-2基因启动子启动转录的活性，用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点，适用于以COX-2基因为靶点的抗肿瘤药物大批量筛选。

公开(公告)号：CN101624599B

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：CN200810040524.8

申请日：2008-07-11

Applicant: 上海中医药大学附属普陀医院

Inventor： 李琦 ,  范忠泽 ,  周利红 ,  王金玉 ,  还一平 ,  殷佩浩 ,  秦建民 ,  孙珏 ,  许建华 ,  刘宁宁

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/66 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种含有COX-2基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过提取人COX-2基因启动子，以含萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic的质粒为载体，插入COX-2基因启动子，构建一种含COX-2基因启动子和萤火虫荧光素酶报告基因的pGL3-Basic-COX-2 promoter重组质粒。将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒共转染到肿瘤细胞中，使其稳定表达。通过检测荧光素酶的活性反映COX-2基因启动子启动转录的活性，用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点，适用于以COX-2基因为靶点的抗肿瘤药物大批量筛选。