一种解淀粉芽孢杆菌来源的核糖核酸酶突变体及其构建方法

    公开(公告)号:CN118956821A

    公开(公告)日:2024-11-15

    申请号:CN202410950322.6

    申请日:2024-07-16

    摘要: 一种解淀粉芽孢杆菌来源的核糖核酸酶突变体及其构建方法,包括Barnase重组表达载体的构建:利用电转化技术,将重组载体pNZ8048‑SPusp45‑Ban‑Bas导入感受态乳酸乳球菌中,构建野生型表达载体,在此基础上,利用定点突变设计并构建Barnase第75位丝氨酸突变为组氨酸的突变体重组质粒,将其导入感受态乳酸乳球菌中构成突变体Barnase(S75H)的异源表达菌株,通过一种金属亲和层析法(Ni2+)来稳定的获得高活力的突变体核糖核酸酶Barnase(S75H)。该突变体的比酶活达到50.125kU/mg。

    一种用于提高细菌自然转化效率的基因及其应用方法

    公开(公告)号:CN118910099A

    公开(公告)日:2024-11-08

    申请号:CN202411060141.2

    申请日:2024-08-02

    摘要: 本发明公开了一种用于提高细菌自然转化效率的基因及其应用方法,所述基因所述基因是根据需钠弧菌的密码子频率对霍乱弧菌基因组上的tfoX基因进行密码子优化而得到的,为VchtfoX基因,在tfoX基因密码子优化得到的基因前后分别添加T7启动子和T7终止子,成为表达盒序列,使用时,将含有所述基因的pET28a‑VchtfoX质粒转化进需钠弧菌,加入诱导剂诱导表达,即成为感受态细胞,再加入供体质粒,实现自然转化,或者先插入VchtfoX基因线性片段,培养形成VCOD‑2,再制作成VCOD‑2感受态细胞,加入供体DNA线性片段,实现基因编辑,本发明的基因和方法能够帮助DNA简单快速、低成本、高效的转化。

    一种耐高温的谷氨酸脱羧酶及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN118853611A

    公开(公告)日:2024-10-29

    申请号:CN202410951590.X

    申请日:2024-07-16

    摘要: 本发明公开了一种耐高温的谷氨酸脱羧酶及其制备方法与应用,属于基因工程技术领域。所述的谷氨酸脱羧酶基因序列见SEQ ID NO.2。本发明基于GABA高产菌株‑希氏乳杆菌GL1的全基因组解析,获得希氏乳杆菌的谷氨酸脱羧酶基因序列,并将基因克隆至pET28a表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达,得到可溶性的重组谷氨酸脱羧酶蛋白。通过镍柱亲和层析、TEV蛋白酶消化、镍柱亲和层析、尺寸排阻色谱,制备较高纯度的谷氨酸脱羧酶。该酶最适温度为60℃,最适pH为4.4;在40~70℃和pH4.0~5.2范围内酶活力较高,其酶活力均保持80%以上。该酶具有较好的温度和pH稳定性,可用于γ‑氨基丁酸工业化生产应用。

    一种改善肥胖的高胆盐水解活性植物乳植杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN118853459A

    公开(公告)日:2024-10-29

    申请号:CN202410868299.6

    申请日:2024-07-01

    摘要: 本发明提供了一种改善肥胖的高胆盐水解活性植物乳植杆菌及其应用,植物乳植杆菌Lp20保藏编号为CCTCC No.M 2024381,保藏日期为2024年03月04日,其对GDCA的水解能力高于目前植物乳植杆菌的对照WCFS1,达到91.62%。将植物乳植杆菌Lp20中基因组bsh1无痕敲除,野生型与突变株的对肥胖小鼠的对照干预发现,仅野生型Lp20能够显著降低体重增长、改善肝脏脂肪变性与降低血脂升高等,直接表明BSH是植物乳植杆菌降脂减重的关键物质基础。从而提供了研究菌株影响宿主代谢产物的高效方法,特别是验证Bsh1对肥胖症缓解的有效方法,消除了亲本细菌细胞背景的影响,提出了植物乳植杆菌bsh1基因在调控植物乳植杆菌胆盐水解活性中的应用可能性,明确胆盐水解酶在体重管理与血脂降低方面的重要性。

    基于艰难梭菌的无细胞基因表达体系

    公开(公告)号:CN118834893A

    公开(公告)日:2024-10-25

    申请号:CN202411177476.2

    申请日:2024-08-26

    IPC分类号: C12N15/74

    摘要: 本发明涉及一种基于艰难梭菌的无细胞基因表达体系,所述体系包括艰难梭菌细胞提取物,所述艰难梭菌细胞提取物是艰难梭菌细胞培养物制备的细胞提取物,所述细胞培养物处于对数生长期,OD600≥0.5的细胞培养物。通过优化艰难梭菌提取物的制备,可以提供在有氧条件下进行蛋白合成的基于艰难梭菌的无细胞基因表达体系,且无需复杂的发酵设备,极大地简化了利用艰难梭菌进行蛋白合成的过程。进一步的,结合表达体系中各组分的构成及浓度的优化,可以搭建获得表达效果更好无细胞基因表达体系。

    一种氯化瑞斯托霉素衍生物的生产菌株、构建方法和用途

    公开(公告)号:CN118813661A

    公开(公告)日:2024-10-22

    申请号:CN202410893594.7

    申请日:2024-07-04

    摘要: 本发明公开了一种氯化瑞斯托霉素衍生物的生产菌株、构建方法和用途;具体是以含有瑞斯托霉素生物合成基因簇的菌株为底盘菌株、或以去甲基瑞斯托霉素苷元的生产菌株为底盘菌株,在其基因组中异源表达卤化酶基因,获得所述氯化瑞斯托霉素衍生物生产菌株;所述氯化瑞斯托霉素衍生物包括氯化瑞斯托霉素、氯化去甲基瑞斯托霉素苷元。目前暂无氯化瑞斯托霉素的生物合成报道,本发明通过异源表达卤化酶生物合成得到氯化瑞斯托霉素和氯化去甲基瑞斯托霉素苷元;本发明提供的氯化瑞斯托霉素和氯化去甲基瑞斯托霉素苷元生产菌株具有良好的遗传可操作性、生长快、发酵时间短,发酵2‑3天即可达到产素的高峰,具有优良的工业发展潜力。