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公开(公告)号：CN104789544A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201410019825.8
申请日：2014-01-16
申请人： 中国科学院福建物质结构研究所
摘要： 本发明提供了一种重组PAI-1抑制剂，所述PAI-1抑制剂包含突变S195A的uPA水解酶结构域或tPA水解酶结构域，具有与PAI-1的结合力。本发明还提供包含所述抑制剂的组合物及其在制备治疗药物中的应用以及制备检测PAI-1的试剂中的应途。本发明的重组PAI-1抑制剂是基于uPA或tPA的水解酶结构域进行改造以优化与PAI-1的结合力而构建的，其中起码包含了S195A点突变体。
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公开(公告)号：CN103789291A
公开(公告)日：2014-05-14
申请号：CN201410060713.7
申请日：2014-02-24
申请人： 东北制药集团股份有限公司
CPC分类号： C12N9/6462 , C12N15/70 , C12Y304/21073
摘要： 一种应用于生物制药技术领域中的重组大肠杆菌发酵液中分离纯化重组人尿激酶原的制备工艺，所述制备工艺包括如下步骤，以人工合成的人尿激酶原全基因序列为模板，通过PCR获取人尿激酶原的目的基因片段，构建含人尿激酶原的原核表达载体，将此表达载体转化大肠杆菌，筛选并挑取阳性克隆株，即为人尿激酶原的基因工程菌株；将人尿激酶原的工程菌株接种到固体LB培养基中，挑取单菌落接种到液体LB培养基中，32℃摇床培养过夜，然后按比例接种到发酵培养基中，32℃摇床培养过夜，再按比例接种到发酵罐内，升温至42℃诱导培养4小时，离心收集菌体，超声破碎菌体，离心收集沉淀，即为人尿激酶原的包涵体。该发明不受自然资源的限制，具有投入少，产出高，利润空间大，溶栓作用机理独特，效果明显，无或低毒副作用。
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公开(公告)号：CN103509772A
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201210199330.9
申请日：2012-06-18
申请人： 王革
CPC分类号： C12N9/6459 , C12Y304/21068
摘要： 本发明从改造组织型纤溶酶原激活剂(简称t-PA)的天然分子结构入手，通过蛋白质工程改造，将t-PA分子中的EGF区、Finger区和Kringle I区删除，保留了具有溶栓作用的Kringle II和蛋白酶二个功能区(t-PA的第176-527位氨基酸)；同时将该保留区域的第122-124位氨基酸HRR突变为AAA，得到t-PA的重组衍生物-组织型纤溶酶原激活剂新型组合突变体(简称rPA)。rPA在具有天然t-PA的优点如血栓特异性的同时，还表现出显著增强的血纤蛋白刺激性，延长的半衰期，增加的酶原性以及提高的对PAI-1抑制的耐受性。因而可能成为具有诸多临床优势的新一代溶栓药物。
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公开(公告)号：CN1962862B
公开(公告)日：2012-10-17
申请号：CN200510115661.X
申请日：2005-11-09
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
摘要： 一种在酵母系统高密度发酵生产重组蚯蚓纤溶酶PI239的方法以及工程菌，方法包括：通过化学合成方法或应用PCR技术扩增DNA/RDA方法获得蚯蚓纤溶酶PI239的DNA序列；含有目的基因的分泌性酵母表达重组质粒的构建；线性化重组质粒电穿孔转化感受态酵母细胞；双层滤膜法筛选高表达株，并放大培养；PI239蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达；以高活性克隆株为种子菌进行高密度发酵生产重组蚯蚓纤溶酶PI239及纯化。工程菌为pPICPI239/KM71-48，保藏号为：CGMCCNo1515。优点：本发明克隆到蚯蚓纤溶酶PI239基因，并成功地进行了表达，为今后开发研究基因工程产品创造了良好的条件，且本发明的蚯蚓纤浴酶PI239为治疗血栓栓塞性疾病等药物提供新的蛋白。
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公开(公告)号：CN100537765C
公开(公告)日：2009-09-09
申请号：CN200510016592.7
申请日：2005-02-25
申请人： 东北师范大学遗传与细胞研究所
摘要： 本发明涉及一种人血管抑素K1-3的制备方法及其制品在抗肿瘤治疗中的应用。本发明在对天然人血管抑素的生成机制、分子特性和生物学活性进行深入系统研究的基础上，对重组人血管抑素的蛋白氨基酸序列进行了优选，并自行设计构建了重组人血管抑素的原核高效表达系统，使血管抑素K1-3的表达量达到工程菌可溶性蛋白的50%以上，同时建立了最适的纯化及复性工艺，使重组人血管抑素的纯度达99.9%以上并能正确折叠。由此获得的重组人血管抑素K1-3能抑制肿瘤新生血管的生成，并对多种肿瘤具有治疗作用。
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公开(公告)号：CN100420745C
公开(公告)日：2008-09-24
申请号：CN03129106.6
申请日：2003-06-05
申请人： 上海实业科华生物药业有限公司
摘要： 本发明提供一种杂交瘤细胞表达尿激酶原的制备方法，该方法中尿激酶原工程细胞株的培养是将尿激酶原工程细胞株先用有血清培养，至细胞密度上升到2-4×105个/毫升后，转入生物反应器内，并降低胎牛血清浓度，待细胞密度上升到2-2.5×106个/毫升后开始无血清灌注培养，通过调节灌注量来始终确保细胞密度不低于1×106个/毫升，并收集培养上清进行纯化。本发明还提供了一种直接采用上述方法中经全无血清灌注培养制得的工程细胞株先进行有血清复苏，然后进行无血清培养，再进行全无血清灌注培养并收集培养上清进行纯化的制备尿激酶原的方法。
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公开(公告)号：CN101225398A
公开(公告)日：2008-07-23
申请号：CN200710026377.4
申请日：2007-01-18
IPC分类号： C12N15/63 , C12N15/58 , C12N15/66 , C12N1/21 , A61K35/74 , A61P9/10 , A61P7/02 , A61P11/00 , C12N15/70 , C12N15/74
摘要： 本发明为一种高表达含多个二硫键的非糖大分子蛋白质或糖基对其功能无重要影响的蛋白质的原核细胞表达系统。更具体的是用于表达有生物活性的突变型人纤维蛋白溶酶元激活剂(mt－PA)的原核细胞表达系统，其主要特征为：1)突变型人纤维蛋白溶酶元激活剂表达序列(mt－PA)；2)构建由阿拉佰糖(arabinose)操纵子PBAD启动子和其调控基因araC组成的表达调控元件的、含有细菌OmpA分泌信号肽的原核表达载体及其表达mt－PA的表达质粒；3)构建同分异构酶DsbC或无信号肽DsbC的表达质粒；4)表达质粒mt－PA和DsbC或无信号肽DsbC的表达质粒共转化trxB/gov突变的感受态宿主菌，构建成高水平表达、有生物活性的分泌型人mt－PA工程菌。
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公开(公告)号：CN101186923A
公开(公告)日：2008-05-28
申请号：CN200710115010.X
申请日：2007-11-20
申请人： 青岛大学
摘要： 本发明公开了一种编码双齿围沙蚕蛋白酶的cDNA序列及其氨基酸序列，分别如序列表中序列1和序列2所示，其中cDNA全长839bp，编码双齿围沙蚕蛋白酶的核苷酸序列长765bp，编码的双齿围沙蚕蛋白酶的氨基酸序列全长254个氨基酸残基，包含22个氨基酸残基组成的信号肽，属于生物医药领域。根据本发明的沙蚕蛋白酶cDNA序列，可以从双齿围沙蚕的cDNA文库中克隆蛋白酶的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统或原核表达系统中获得表达，重组沙蚕蛋白酶具有纤维蛋白酶原激活活性，可作为溶栓药物，用于预防或治疗心肌梗塞、脑动脉血栓等疾病。
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公开(公告)号：CN101096660A
公开(公告)日：2008-01-02
申请号：CN200610089452.7
申请日：2006-06-28
申请人： 中国科学院生物物理研究所
摘要： 本发明公开了一种基于葡激酶结构特性的新型长效溶栓药物，还公开了其制备方法及用途。本发明采用蛋白融合技术构建了融合蛋白，该融合蛋白在保留葡激酶特异性识别血栓的基础上融合了水蛭素的溶栓活性片段以及在C端加入一段血浆纤维蛋白溶酶原的激活因子(t-PA)的K2结构域，以增加葡激酶的血浆纤维蛋白特异结合的能力和增加其抗血栓的活性，融合后蛋白在溶栓及特异选择性方面都得到显著地提高。通过基因操作的方式将葡激酶或其衍生物的36，66，75，83，85，91，100，102，109，110，131，136位氨基酸顺序替换为丙氨酸，甘氨酸，精氨酸，丙氨酸，丙氨酸，丙氨酸，天门冬氨酸，丝氨酸，丙氨酸，丙氨酸，色氨酸，精氨酸以减少其免疫原性。融合蛋白经大肠杆菌表达、分离、纯化后进行聚乙二醇化修饰以最大限度地降低免疫原性和延长体内半衰期。本发明的基于葡激酶的融合蛋白是一种长效和高效溶栓药物，具有溶栓和抗凝双重活性。
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