组织型纤溶酶原激活剂的新型组合突变体

    公开(公告)号:CN103509772A

    公开(公告)日:2014-01-15

    申请号:CN201210199330.9

    申请日:2012-06-18

    申请人: 王革

    IPC分类号: C12N9/48 C12N15/58 C12N15/81

    CPC分类号: C12N9/6459 C12Y304/21068

    摘要: 本发明从改造组织型纤溶酶原激活剂(简称t-PA)的天然分子结构入手,通过蛋白质工程改造,将t-PA分子中的EGF区、Finger区和Kringle I区删除,保留了具有溶栓作用的Kringle II和蛋白酶二个功能区(t-PA的第176-527位氨基酸);同时将该保留区域的第122-124位氨基酸HRR突变为AAA,得到t-PA的重组衍生物-组织型纤溶酶原激活剂新型组合突变体(简称rPA)。rPA在具有天然t-PA的优点如血栓特异性的同时,还表现出显著增强的血纤蛋白刺激性,延长的半衰期,增加的酶原性以及提高的对PAI-1抑制的耐受性。因而可能成为具有诸多临床优势的新一代溶栓药物。

    一种生产瑞替普酶的大肠杆菌培养方法

    公开(公告)号:CN104342396A

    公开(公告)日:2015-02-11

    申请号:CN201310326179.5

    申请日:2013-07-30

    IPC分类号: C12N1/21 C12R1/19

    CPC分类号: C12N9/52 C12Y304/21068

    摘要: 本发明涉及一种生产瑞替普酶的大肠杆菌培养方法,根据本发明的培养方法,包括以下步骤:1)通过三次扩增获得发酵工作种子液;2)发酵前准备:向发酵罐中添加泡敌、发酵培养基,将发酵工作种子液接种于发酵罐;3)发酵:控制发酵条件,当生长至OD600=20时,开始补料流加培养直至发酵结束;4)当OD600=30时,添加IPTG诱导表达,结束后离心,即得目的菌体。本发明采用的培养方法和培养基具有高稳定表达的特性,通过控制关键的发酵工艺条件,使表达水平较高,且工艺简便,稳定性好,易于工业化大生产。