一种人轮状病毒毒株、分离培养方法、鉴定及用途

    公开(公告)号:CN114940706B

    公开(公告)日:2023-08-15

    申请号:CN202210419301.2

    申请日:2022-04-20

    Inventor: 李金松 段招军

    Abstract: 本发明公开了一种人轮状病毒毒株、分离培养方法、鉴定及用途,本发明所述人轮状病毒毒株为A组G2P4型病毒毒株,其保藏编号为CGMCC NO.45085;包括如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列;包括如SEQ ID NO:12至SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列。人轮状病毒毒株的分离培养方法中,进行轮状病毒激活时,胰酶的浓度为15μg/mL;维持液中胰酶浓度为15μg/mL‑20μg/mL。本发明分离到一种G2P[4]型轮状病毒流行株,为进一步研究其生物学特性奠定了基础,可用于制备预防和/或治疗由轮状病毒诱发的疾病的疫苗或药物或诊断试剂。

    一种原核表达重组轮状病毒抗原P2-VP8的纯化方法

    公开(公告)号:CN109517043B

    公开(公告)日:2022-06-14

    申请号:CN201811409551.8

    申请日:2018-11-23

    Abstract: 本发明涉及一种原核表达重组轮状病毒抗原P2‑VP8的纯化方法,属于蛋白质纯化技术领域。本发明所述纯化方法包括菌体预处理的步骤、柱层析的步骤;其中,所述柱层析的步骤为:①先将预处理后的菌体采用强阴离子填料柱层析,获得洗脱峰;②再将步骤①所得洗脱峰采用羟基磷灰石填料柱层析,获得穿透峰。本发明所述纯化方法中羟基磷灰石填料柱层析对纯度的提升也很明显,传统的疏水层析后电泳可见明显杂带,纯度在90%,羟基磷灰石填料去除杂蛋白的能力较强,电泳条带单一,无其他杂带,纯度可到99%。

    重组人轮状病毒VP7蛋白的表达、免疫原性的分析方法

    公开(公告)号:CN114478714A

    公开(公告)日:2022-05-13

    申请号:CN202210115142.7

    申请日:2022-02-04

    Inventor: 王红涛

    Abstract: 本发明属于生物工程技术领域,即重组人轮状病毒VP7蛋白的表达、免疫原性的分析方法。首先,根据GeneBank中已发表的VP7全序列(NC_007571.1)设计引物,通过对病料核酸提取,反转录cDNA为模板,克隆VP7基因后并构建表达载体pESP‑2‑VP7,转化粟酒裂殖酵母。经过1%IPTG诱导VP7表达,分离纯化,获得VP7蛋白,将VP7蛋白以不同免疫方式免疫小鼠评价其免疫保护效果。结果表明:引物设计与预测结果一致,克隆VP7基因长度为1050bp,SDS‑PAGE以及Western Blot鉴定结果表明其蛋白大小为63 kDa;VP7蛋白免疫小鼠后,其IgG、SIgA和中和抗体结果显示,50μg/只滴鼻免疫效果优于20μg/只滴鼻和注射组(50、20μg/只);且滴鼻免疫具有较高的攻毒保护率为100%。

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