基于CRICPR-Cas9体外改造腺病毒载体的方法

    公开(公告)号:CN105602972A

    公开(公告)日:2016-05-25

    申请号:CN201610037192.2

    申请日:2016-01-20

    IPC分类号: C12N15/66

    摘要: 本发明公开了一种基于CRICPR-Cas9体外改造腺病毒载体的方法。本发明还提供了适于改造大质粒载体的分子克隆方法,包括如下:根据出发质粒的待改造位点设计合适的sgRNA,采用Cas9蛋白和sgRNA体外切割所述出发质粒,再基于同源重组的方法将被切割的出发质粒与目的基因相连接,从而完成改造。本发明所提供的方法有效的解决了大质粒载体用常规的分子生物学手段很难找到合适的限制性酶切位点对其进行改造的问题。该方法是点突变试剂盒的改进,点突变试剂盒一般就包括对目的蛋白进行点突变、构建结构域缺失的截短体等,本发明有效解决了点突变试剂盒对超过10kb的大载体进行突变时容易引起二次突变(由于PCR酶保真性引起的随机突变)的技术难点。