用于植物基因表达载体构建的质粒载体及其应用

    公开(公告)号:CN107099550A

    公开(公告)日:2017-08-29

    申请号:CN201710360919.5

    申请日:2017-05-13

    Applicant: 宁夏大学

    CPC classification number: C12N15/8202 C12N15/66

    Abstract: 本发明公开了一种用于植物基因表达载体构建的质粒载体及其应用。利用经大肠杆菌质粒pUC18改造的pKAFCR1和经双核农杆菌Ti质粒pBI121改造的pKAFCR100两种质粒,在pKAFCR1的35S启动子和NOS终止子之间引入多个克隆酶切位点MCS,然后将包含35S‑MCS‑NOS片段切下连接到pKAFCR100,从而构建成质粒载体pNULPGE200。经PCR等方法克隆得到的目的基因可以多种方式很方便地连接到该质粒载体的35S启动子与NOS终止子之间的多个克隆酶切位点MCS,使目的基因能够在植物体内稳定表达;该质粒载体还具有独立表达的卡那霉素NPT II耐性基因和sGFP绿色荧光蛋白报告基因,能够显著提高转基因植物细胞的选拔效果。

    一种快速高效地在葡萄中瞬时转化基因的转化方法

    公开(公告)号:CN106755080A

    公开(公告)日:2017-05-31

    申请号:CN201710034405.0

    申请日:2017-01-18

    CPC classification number: C12N15/8205 C12N15/8202 C12N15/8207

    Abstract: 本发明提供了一种快速高效地在葡萄中瞬时转化基因的转化方法。本发明将载有重组质粒的GV3101农杆菌菌株和p19菌株分别培养,等体积混合备用;选择5周龄的葡萄组培苗的植物组织,采用注射器法高压将菌液完全浸入植物组织;之后植物组织保持水分和透气;经黑暗培养和光照培养后,经检测即可用于后续实验。本发明将葡萄组培苗叶片直接置于注射器内,依靠注射器拉动带来的瞬时高压迅速的实现了农杆菌菌液的浸入,操作简单,同时减少了操作的时间,节省了人力物力和财力。另外这种方法还保证了叶片不会出现传统真空泵抽气制造高压时,由于抽气时间过长而造成的植物细胞膜破裂而引起细胞的死亡,极大地提高了转化的效率。

    穿膜肽TAT2在转基因棉花培育中的应用

    公开(公告)号:CN105567729A

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201610068076.7

    申请日:2016-02-01

    Applicant: 河南大学

    CPC classification number: C12N15/8202

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,具体涉及穿膜肽TAT2在转基因棉花培育中的应用。所述穿膜肽TAT2,包括18个氨基酸,序列如SEQ ID NO.1所示,在棉花雌蕊受精完成后,将混合均匀的待转化DNA与穿膜肽TAT2溶液通过花粉管注入子房,用于携带拟转化DNA片段进入棉花基因组。本发明中,由于穿膜肽可直接将外源DNA顺利带进受精细胞,并进入细胞核,因此相较于传统的花粉管通道法遗传转化效率显著提高;其次,该方法不依赖于棉花的组培再生体系,操作简便,无需昂贵仪器,生产成本低廉,因而该方法的推广应用可为棉花品种改良和基础研究提供更有效的方法。

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